卢从群，刘章锁，张方兴，郭 佳

    ·论著·

    帕立骨化醇抑制糖尿病肾病小鼠肾组织炎性反应研究

    卢从群，刘章锁，张方兴，郭 佳

    目的利用2型糖尿病肾病db/db小鼠模型，探讨维生素受体激动剂帕立骨化醇对糖尿病肾病小鼠肾组织炎性反应的抑制作用。方法2015年1—11月，将60只雄性5周龄SPF级C57BLKS/J db/db小鼠采用随机数字表法分为db/db-对照组(N组，n=20)、db/db-二甲基亚砜组(D组，n=20)、db/db-帕立骨化醇组(P组，n=20)，同窝出生的db/m小鼠作为正常对照组(C组，n=20)。10周龄时P组小鼠腹腔注射0.3 μg/kg帕立骨化醇，隔日1次，D组小鼠腹腔注射与P组等量的二甲基亚砜+0.9%氯化钠溶液，N组和C组小鼠不做处理。干预12周后测定小鼠体质量、空腹血糖、24 h尿蛋白定量；留取肾组织并进行肾组织病理学检查。应用实时荧光定量PCR、Western blotting和免疫组化检测炎性因子白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA及其蛋白的表达水平。结果干预12周后，4组小鼠体质量、空腹血糖水平、24 h尿蛋白定量比较，差异均有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1实验动物雄性5周龄SPF级C57BLKS/J db/db小鼠和同窝出生的db/m小鼠由南京大学模式动物中心提供，于河南省实验动物中心动物房分笼饲养，4～5只/笼，室温18～24 ℃，实验期间自由进食饮水，喂养普通饲料，不使用胰岛素和其他降糖药物。

    1.2主要实验仪器和试剂安稳血糖仪(三诺生物传感股份有限公司)，超低温冰箱(日本SANYO公司)，液氮容器(北京恒奥生物科技有限公司)，电子天平(ARI530型，美国OHAUS公司)，干式恒温器(GL.150B型，海门市其林贝尔仪器)，公司制冰机(IEC-25型，苏州雪尼)，数显恒压恒流电泳仪(EPS.300型)、转移电泳槽(VE.186型)〔天能(Tanon)公司〕，核酸提取仪(西安天隆科技有限公司)，帕立骨化醇(货号：P126516-1 mg，CAS号：131918-61-1,上海阿拉丁有限公司)，4%多聚甲醛、二甲基亚砜(北京鼎国昌盛有限公司)，兔抗鼠单克隆抗体IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)(Abcam)，实时荧光定量PCR利用cDNA合成试剂盒(FSQ-101,日本东洋纺公司)，KAPA SYBR快速定量PCR试剂盒(KR-0389,美国Kapa公司)，康为总RNA提取试剂盒(康为公司)。

    1.3实验动物分组及标本收集2015年1—11月 ......