茅国峰，骆振刚

    ·论著·

    ·临床用药分析·

    社区获得性尿道致病性大肠埃希菌毒力基因检测及其与预后的相关性研究

    茅国峰1*，骆振刚2

    目的 了解社区获得性尿道致病性大肠埃希菌(UPEC)的毒力基因及耐药性，探讨毒力基因与疾病预后的相关性。方法 收集2013—2014年于绍兴市人民医院治疗的尿路感染(UTI)患者56株社区获得性UPEC，采用纸片扩散法(K-B法)和微量稀释法进行药敏试验，按照美国临床与实验室标准协会(CLSI)制定的药敏试验标准(2014年版)判读药敏试验结果。PCR法检测P菌毛亚单位A(papA)、细胞毒素坏死因子1(cnf1)、细胞毒素坏死因子2(cnf2)、定植因子抗原B(cfaB)、侵袭质粒抗原B(ipaB)、hofQ、ompT毒力基因，并结合临床资料分析患者的疾病进展和转归情况。结果 56株社区获得性UPEC共检测到ompT毒力基因阳性菌株20株(35.7%)，papA毒力基因阳性菌株4株(7.1%)，未检测到其他毒力基因。ompT毒力基因阳性和阴性菌株均未发现对哌拉西林/他唑巴坦、美洛培南、丁胺卡那霉素、厄他培南、亚胺培南和替加环素存在耐药性。ompT毒力基因阳性菌株对头孢他啶的耐药率高于阴性菌株，差异有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 菌株来源 收集2013—2014年于绍兴市人民医院治疗的UTI患者56株社区获得性UPEC，患者均为女性急性膀胱炎患者，入院48 h内分离出UPEC，且患者1年内无住院史，无长期留置导尿管或侵入性器械操作史。

    1.2 方法

    1.2.1 菌株鉴定及药敏试验 菌株鉴定采用法国生物梅里埃公司生产的Vitek-2细菌鉴定仪鉴定，药敏纸片为英国OXOID公司产品，M-H培养基采用法国生物梅里埃公司产品。药敏试验采用纸片扩散法(K-B法)和微量稀释法，质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC70060，均购自原卫生部临床检验中心，按照美国临床与实验室标准协会(CLSI)制定的药敏试验标准(2014年版)[2]判读药敏试验结果。

    1.2.2 PCR法检测毒力基因 PCR法检测papA、cnf1、cnf2、cfaB、ipaB、hofQ、ompT毒力基因。煮沸法提取DNA模板，扩增引物序列参考文献[3]，PCR反应体系25 μl，其中10×Buffer 2 μl，dNTP 2 μl，引物各1 μl，DNA聚合酶0.25 μl，DNA模板2 μl，剩余体积用无菌双蒸馏水补足。PCR反应条件：93 ℃预变性2 min；93 ℃变性30 s ......