赵静苗，胡继宏，王秋萍

    ·论著·

    ·中医·中西医结合研究·

    黄芪甲苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的研究

    赵静苗，胡继宏*，王秋萍

    目的 探讨黄芪甲苷(AST)诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化的作用。方法 对第2代BMSCs进行传代培养，采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度AST在24、48、72 h时对BMSCs的增殖作用。取第4代BMSCs分为BMSCs组、5-氮杂胞苷组(5-AZA组)和AST组，5-AZA组和AST组分别加入浓度为10 μmol/L的5-AZA和浓度为100 μmol/L的AST诱导液进行诱导，采用荧光倒置相差显微镜观察诱导后各组细胞的形态变化。通过Real-time qPCR法检测诱导后各组结蛋白(Desmin)、α横纹肌肌动蛋白(α-SCA)、肌钙蛋白I(cTnI)mRNA表达水平；采用Western blotting法检测各组肌钙蛋白T(cTnT)表达水平。结果 100 μmol/L AST亚组孔72 h时BMSCs增殖情况好于24、48 h时及其他浓度AST亚组孔各时间点(P1 材料与方法

    1.1 实验材料 第2代SD大鼠BMSCs(购自北京医科利昊生物科技有限公司)，DMEM培养基(500 ml，购自HyClone公司)，胎牛血清(500 ml，购自HyClone公司)，AST(购自南京森贝伽生物科技有限公司，中国食品药品检定研究院批号：110781-200613)，5-AZA、M-MLV(购自Promega公司)，Oligo(dT)纤维素〔购自生工生物工程(上海)股份有限公司〕，Bulge-LoopTMmiRNA qPCR Primer set(购自广州锐博生物科技有限公司)，Rnase Inhibitor(购自Promega公司)，SYBR Master Mixture(购自TAKARA公司)、Primer(购自上海吉凯基因化学技术有限公司)。BCA蛋白浓度测定试剂盒(购自北京索莱宝科技有限公司)，RIPA强裂解液(购自上海碧云天生物技术有限公司)，二甲基亚砜(DMSO，购自北京索莱宝科技有限公司)Prestained Protein Marker(购自美国Thermo公司)，4×蛋白上样缓冲液(购自Solarbio公司)，ECL-PLUS/kit(购自美国Thermo公司)，兔单克隆抗体Nesprin1、小鼠单克隆抗体肌钙蛋白T(cTnT)及肌钙蛋白I(cTnI)(购自英国Abcam公司)。

    1.2 实验仪器 CO2恒温培养箱(SANYO)、荧光倒置相差显微镜(Olympus)、Nanodrop 分光光度计(Thermo 2000/2000c)、稳压电泳仪(上海天能EPS-600)、超细匀浆机(FLUKO公司F6/10)、Real-time PCR仪器(Agilent公司 MX3000p)、酶标分析仪(北京普朗公司DNM-9602A型)、低温高速离心机(德国Kontront-42K)等 ......