孙雪东，严一核，褚韦韦，张亦婷，应利君

    ·论著·

    血必净通过Rho激酶信号通路对脓毒症急性肾损伤后肾小管细胞的影响研究

    孙雪东*，严一核，褚韦韦，张亦婷，应利君

    目的 探讨早期应用血必净通过Rho激酶信号通路对脓毒症急性肾损伤后肾小管细胞凋亡的保护作用。方法 2014年8月—2015年6月，54只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组、脓毒症组、血必净组，每组18只。脓毒症组和血必净组以盲肠结扎穿孔(CLP)法制造脓毒症模型，脓毒症组大鼠CLP后0.5 h尾静脉注射0.9%氯化钠溶液4 ml/kg；血必净组大鼠CLP后0.5 h尾静脉注射血必净注射液4 ml/kg。造模后6、24 h每组分别选取9只大鼠采用激光多普勒血流仪测定血流灌注(BPU)情况，采用全自动生化仪检测血肌酐、尿素氮、肌酐清除率(CrCl)，病理组织学检测评定肾小管损伤评分，采用原位末端标记(TUNEL)法计算凋亡指数(AI)，Western blotting法检测Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK-1)、肌球蛋白磷酸酶靶亚基1(MYPT-1)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)的表达水平。结果 3组大鼠造模后6 h BPU及造模后24 h BPU、血肌酐、尿素氮、CrCl比较，差异均有统计学意义(P0.05)；造模后24 h，3组肾小管损伤评分、AI比较，差异有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 实验动物 2014年8月—2015年6月，选取SPF级16～18周龄SD雄性大鼠54只，体质量(200±20)g，由浙江大学医学院实验动物中心提供和饲养，合格证号:SYXK(浙)2010-0126。实验造模前在室温20 ℃、相对湿度45%～70%的环境下，维持12 h/d光照，昼夜循环，自由进食、水；基础饲料适应性喂养1周。本实验通过医院伦理委员会论证。

    1.2 动物模型的制作和分组 参照文献[5]以盲肠结扎穿孔(CLP)法制造脓毒症模型。CLP后0.5 h大鼠精神软弱，活动减少，毛色杂乱无光泽，呼吸稍促，喜饮水，解稀便作为动物模型成功的判定标准。采用随机数字表法将大鼠分为假手术组、脓毒症组、血必净组，每组18只。假手术组麻醉后开腹翻动肠道，随即关腹，术后0.5 h尾静脉注射0.9%氯化钠溶液4 ml/kg；脓毒症组大鼠CLP后0.5 h尾静脉注射0.9%氯化钠溶液4 ml/kg；血必净组大鼠CLP后0.5 h尾静脉注射血必净注射液(天津红日药业股份有限公司，10 ml/支，批准文号：国药准字Z2004003)4 ml/kg ......