潘阳琼，陈豪，宋春兰，成怡冰*

    p63基因作为p53家族成员之一，定位于3号染色体长臂2区7带(3q27～3q29)，分布于皮肤、肌肉、乳腺、食管、肺、脾、淋巴细胞、神经组织、消化系统及泌尿生殖系统。p63基因的表达受两种不同启动子的调节而产生两种具有不同活性的蛋白质，一种是全长链的活化型p63(TAp63)，另一种是显性失活的截短型p63(ΔNp63)[1]。潘阳琼等[2]研究显示，TAp63基因在成年人血液系统恶性肿瘤中表达增高，而这与TAp63基因在实体肿瘤中作用不同有关。为探索TAp63基因在儿童急性白血病发生、发展中的作用及其临床意义，本研究采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法，对儿童急性白血病初发、复发、化疗后达完全缓解的患儿以及对照组骨髓单个核细胞中TAp63基因的表达进行了检测。

    1 对象与方法

    1.1 研究对象 收集2015年6月—2016年6月郑州大学第三附属医院和郑州儿童医院儿科住院的初治或复发急性白血病患儿104例为急性白血病组，患儿均符合儿童急性白血病的诊断标准[3]，其中男64例，女40例；年龄1～12岁，中位年龄7岁；急性淋巴细胞白血病(ALL)80例〔急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)61例，急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)19例〕，急性非淋巴细胞白血病(ANLL)24例；初发患儿90例(高危型18例、低危型72例)，复发患儿14例(均为高危型)。同期选择郑州大学第三附属医院和郑州儿童医院住院的非恶性血液病患儿36例作为对照组，其中男24例，女12例；年龄2～13岁，中位年龄8岁；包括传染性单核细胞增多症16例、免疫性血小板减少症14例、缺铁性贫血6例。

    1.2 TAp63 mRNA检测 所有患儿化疗前采集骨髓标本2～4 ml，置于肝素抗凝管中，用Ficoll液分离骨髓单个核细胞，采用美国Gibco公司的TRIzol试剂盒，利用一步法提取总RNA。按照反转录试剂盒说明书步骤进行，该试剂盒及说明书由北京康为世纪生物科技有限公司提供，反应体系20 μl，包括 5×RT Mix 4 μl，PrimerMix 2 μl，RNA Template 5 μl，HiFi-MMLV Mix 1 μl，RNase-free water 8 μl，37 ℃ 60 min，70 ℃ 10 min后终止反应。PCR引物由生工生物工程(上海)股份有限公司设计合成，TAp63上游引物5'-GGGTGAGCGTGTTATTGATG-3'，下 游 引 物5'-TTAGATGCCAGGTCAGATGTT-3' ......