闫慧明，安燕，张雪，刘咏梅，秦洁莉，刘远，王武龙，岳建伟，赵洪

    类风湿关节炎(RA)是以慢性破坏性多关节炎为主要表现的自身免疫性疾病，病理变化是自身免疫异常引起的致炎细胞因子和炎性递质等释放，其发病机制目前尚未完全明确，如不及时有效诊治，70%的患者2年后可发生不可逆的关节破坏、畸形和功能丧失。大量研究证实Toll样受体(TLR)/髓样分化因子88(MyD88)信号通路在RA的发病中具有重要作用[1]。MyD88是TLR信号通路中的一个关键的转导蛋白，其死亡结构域的缺失可导致下游产生炎性细胞因子白介素(IL)-6、IL-12及肿瘤坏死因子α(TNF-α)作用明显减弱，现有研究认为双氢青蒿素(DHA)及其衍生物对免疫系统有双向调节作用[2]。国内外关于DHA对RA作用机制的研究较少，认为其可干预TLR介导的信号通路[3]。本研究通过DHA干预RA患者TLR/MyD88介导的信号通路，探讨DHA治疗RA的可能作用机制，为RA治疗提供理论依据。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 选取2017年10月—2018年12月于内蒙古科技大学包头医学院第二附属医院就诊的活动期RA患者10例为观察组，均符合2010年美国风湿病学会/欧洲抗风湿联盟(ACR/EULAR)中的相关诊断标准[4]。10例患者中男2例，女8例；年龄25～79岁，平均(52.2±19.5)岁。同时随机选取本院体检中心健康体检者10例为对照组，其中男2例，女8例；年龄29～40岁，平均(34.2±4.8)岁。排除患有血液系统、心脑血管系统及其他自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮、干燥综合征等患者。研究对象均签署了知情同意书。本研究通过了内蒙古科技大学包头医学院第二附属医院伦理委员会审查。

    1.2 试剂与仪器 人外周血淋巴细胞分离液、PBS、RPMI-1640培养基、胎牛血清、Trizol试剂、Ficoll细胞分离液、cDNA第一链合成试剂盒、SDS-PAGE凝胶配制试剂盒购自大连宝生物公司，TLR2抗体及抑制剂、MyD88抗体、TNF-α试剂盒、IL-6试剂盒购自美国Pepro Tech公司，DHA购自四川光大制药有限公司，荧光定量PCR循环仪购自ABI-7500美国 Thermo公司，Western电泳仪购自美国伯乐公司，流式细胞仪购自美国 Beekton Dickson 公司。

    1.3 人外周血淋巴细胞分离、培养 两组研究对象于清晨空腹时抽取肝素抗凝静脉血5 ml，立即置于离心机，离心半径12 cm，4 000 r/min离心10 min分离血浆 ......