永康地区女性HPV感染的分子流行病学调查
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摘要：目的调查永康地区23种人乳头瘤病毒(HPV)基因型的分子流行病学特点。方法：取1000例女性宫颈分泌物,应用聚合酶链反应(PCR)结合反向杂交分析技术检测HPV6等23种基因型,分析病学特点。结果：HPV患者总感染率为32.6%；HPV高危型占检出HPV基因型的70.8%；其中,高危型中HPV16型的感染率最高，占检出HPV基因型的16.6%，低危型中HPV11型感染率最高，占检出HPV基因型的11.0%；不同年龄段HPV感染率基本相同。结论：本研究提供了23种常见HPV基因型的分子流行病学资料,对HPV疫苗开发、应用及HPV感染的防治具有重要价值。
关键词：人乳头瘤病毒 基因型 宫颈癌
【中图分类号】R-1 【文献标识码】B 【文章编号】1008-1879(2012)02-0240-02
HPV感染及宿主癌变的预防成为国内外研究热点。本研究采用聚合酶链反应(PCR)结合反向杂交分析技术检测23种常见HPV基因型,调查本地区HPV基因型的分子流行病学特点。
1 材料与方法
1.1 标本来源 本院妇产科门诊患者和健康体检者,共1000例,年龄18岁～69岁。
1.2 标本采集 用女性专用宫颈刷擦拭宫颈处,采集足够的阴道分泌物,取出后放入洗脱管中,沿折痕处将宫颈刷柄折断,旋紧洗脱管盖,做好样品标记,-20℃保存送检。
1.3 主要仪器和试剂 人乳头瘤病毒分型基因检测试剂盒及相关试剂为亚能生物技术(深圳)有限公司产品，LITTLE GENIUS基因扩增仪(LIFE EXPRESS),分子杂交箱(Combi-H12型),超速低温离心机。
1.4 PCR及反向杂交检测:①DNA提取:用镊子在洗脱管内充分刷洗宫颈刷，将洗脱液倒入1.5ml离心管中，13000rpm离心10min,弃上清，加入50μl裂解液充分混匀，移至恒温金属浴上，100℃干浴10min，再13000rpm离心10min，保留上清液备用。②PCR扩增:扩增条件为50℃15min、95℃10min,然后94℃30s、42℃90s、72℃30s共40循环,再72℃5min延伸。③杂交:将编好编码的反应膜条放入15ml的离心管，加入5mlA液和相应PCR扩增产物，混匀后放入沸水浴中加热10min，再放入杂交箱51℃杂交2小时。④洗膜:取出膜条,移至已装有预热B液的50ml离心管中,于杂交箱51℃轻摇洗涤15min。⑤显色:用A液配制1:2000的POD溶液,室温轻摇浸泡30min,弃去POD溶液。用A液室温轻摇洗涤两次,每次5min。用C液室温洗涤2min。将膜条浸泡于显色液(需新鲜配制使用,按顺序加入C液19ml,TMB1ml,3%H2O210μl)中避光显色15min左右,倒去显色液,用清水冲洗一次膜条。
1.5 结果判断。每张膜条的PC位点显色结束后均应有蓝色斑点出现，结果视为有效；根据膜条上蓝色斑点出现的相应位置即可判断HPV的亚型为阳性，反之为阴性。
1.6 统计学处理对不同年龄段的HPV感染率采用SPSS17.0统计学软件处理数据,行X2检验。
2 结果
2.1 1000例标本23种HPV基因型检测结果,见表1。
2.2 不同年龄段HPV感染率构成比，见表2。
3 讨论
这里所查的23种基因型,是中国人群感染HPV的主要基因型,约占总HPV感染的95%[1]。研究发现，HPV患者总感染率达32.6%(326/1000)，其中高危型HPV(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73、MM4)的感染率占检出的23种HPV基因型的70.8%(367/518),高危型中HPV16型的感染率占居首位达16.6%(86/518) ......
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