化学法与免疫法测定便潜血的临床应用评价
摘要：目的：探讨粪便潜血二种检测方法的优劣和应用。方法：用邻联甲苯胺(O-tolidine)法和免疫胶体金法分别检测300例粪便标本进行对照实验并分析。结果：二种方法测得结果一致性符合率在90%以上。结论：受饮食影响因素，化学法灵敏度、特异性较免疫胶体金法低；免疫胶体金法有假阴性结果，故建议二者结合判断。
关键词：大便潜血 邻联甲苯胺法 免疫胶体金
The Comparison Between the Chemical Method and Immunogold Method in Detecting Sedoccult Blood
Duan Xiangyuan
Abstract:Objective:To explore the comparability between the chemical method and immunogold method in detecting sed occult blood.Methods:To detect the sed occult blood of 300 specimens with both O-tolidine method and immunogold method.then analyse the results.Results:2 kinds of methods in line with the consistency of the results of the measured rate of greater than 90%.Conclusion:Food and drink impact the results of chemical method very much.so chemical method is lesssensitive and specific than immunogold method.But immunogold method also has false positivereaction，therefore we suggest detecting sed occult blood with the both two methods.
, 百拇医药
Keywords：Sed occult blood O-tolidine method Immunogold method
【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1008-1879(2012)03-0026-01
大便潜血 (fecesoccultblood,FOB)实验是临床诊断消化道出血的一项重要项目，也是普查筛选消化道肿瘤的有效手段。常用的化学法主要有联苯胺法、邻联甲苯胺法、无色孔雀绿法、愈创木脂法、匹拉米洞法等,以邻联甲苯胺法较为实用。随着近年来对粪便隐血检测试剂的深入研究,免疫法测定潜血，方便快捷并取得了较满意的结果，已逐渐取代邻联甲苯胺法。但实际工作中，某些特殊标本用胶体金试纸法检测结果与临床不符。为进一步了解粪便隐血免疫法与化学法在检测灵敏度特异性方面的特点，我们用化学法(邻联甲苯胺法)与免疫法(胶体金试纸法)测定粪便隐血结果作如下比较，探讨二者在临床上的应用价值。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 标本。测定本院300份无重复门诊及住院患者新鲜大便，均为成年人，女89例，非月经期，男211例(均排除痔肛裂出血)。患者随机分为A、B二组：A组(65例)严格按照医嘱进行饮食和药物控制3日。B组(235例)未按照医嘱进行饮食和药物控制。
1.2 试剂。艾康生物技术公司提供的便潜血胶体金检测试纸条(批号20070124)；邻联甲苯胺由上海远航试剂厂生产，冰乙酸及无水乙醇由开封化工厂生产，均为AR级。10g/L邻联甲苯胺冰乙酸试剂、3%过氧化氢自配。
1.3 方法。邻联甲苯胺法按文献操作[1]，便隐血胶体金试纸法严格按说明书操作。对收集的每份标本分别做邻联甲苯胺法和便隐血胶体金试纸检测，记录同一份二种不同方法的测定结果。邻联甲苯胺法阳性而胶体金试纸检测阴性的标本，按一定比例稀释后以胶体金法再测。
, 百拇医药 2 结果
2.1 化学法(邻联甲苯胺法)和免疫法(胶体金法)对二组检测结果的比较。见表1。
2.2 A组排除饮食及药物的影响，邻联甲苯胺法和胶体金法对A组检测结果基本一致。
2.3 B组受饮食及药物等干扰因素的影响，邻联甲苯胺法阳性率明显高于胶体金法。B组中80例化学法阳性者，胶体金法均为阴性，经咨询病史和饮食情况，除5例服用铁剂外，其他人近日曾食用动物血、肉、肝脏、及富含叶绿素食物等。其中胶体金法为阴性的2例柏油样便标本经1∶50～1∶100稀释后以胶体金法重测皆为阳性。
3 讨论
粪便隐血实验是消化道疾病辅助诊断试验。邻联甲苯胺法利用血红蛋白中的亚铁血红素具过氧化物酶活性，催化过氧化氢放出新生态氧，把受体邻联甲苯胺氧化成联甲偶氮苯而显蓝绿色。显色的深浅反映了Hb的多少，即出血量的大小。该法可检出1～5mg/L的Hb，消化道5～10ml出血即为阳性。但缺乏特异性和准确性，易出现假阳性反应，任何有类似氧化物酶活性的物质都可影响此实验，外源性动物食品如含有Hb、肌红蛋白，其含铁血红素的作用可使试验阳性；大量生食富含叶绿素蔬菜，其中含有活性的植物过氧化物酶也可催化H2O2分解出现阳性反应。邻联甲苯胺法灵敏性低于胶体金法[2]，故极少量的出血会造成邻联甲苯胺法(阴性)胶体金法(阳性)的结果。此时粪便外观通常无明显异常，但如果血红蛋白在消化道停留时间过长，或受细菌分解等因素而降解，其与胶体金试纸上包被的抗体的相应抗原受到破坏时就会出现假阴性，若此时出血量在邻联甲苯胺法检测限上就会出现邻联甲苯胺法阳性而胶体金法阴性的结果。另外当出血量大于胶体金法检测范围，随着血红蛋白含量增加，抗原抗体复合物反而减少，产生后带现象，免疫胶体金法出现假阴性，上述两种情况大便外观通常会有明显改变，只需将粪便溶液调配成一定浓度后检测，免疫胶体金法可获阳性结果。由于胶体金单克隆抗体免疫法是利用金标Hb-抗体与Hb结合后，向上扩散分别与测试区的抗-Hb抗体及对照区的Hb结合，此时胶体金的颗粒聚集呈颜色反应，它只特异地针对人-Hb抗原表位，基本排除了饮食及药物因素的干扰；且具有很好的灵敏度，一般Hb为0.2mg/L就可得到阳性结果[3-4]。被世界卫生组织(WHO)和世界胃肠镜检查协会推荐作为粪便隐血实验的一种较为确认的方法[5]，且对操作者无损害，但其成本较化学法高。
, 百拇医药
鉴于两种方法各有优缺点，有条件的实验室应同时开展两种方法：二者皆为阳性判断为真阳性；化学法阳性而免疫胶体金法阴性者，若外观无改变者建议禁肉食、富含叶绿素食物、停用某些已知有影响的药物2 d～3 d后复查，若外观有所改变者稀释重测免疫胶体金法；若化学法阴性而免疫胶体金法阳性者建议连续复查2次及做进一步检查。
参考文献
[1] 叶应妩，王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京:东南大学出版社,2006.310-311
[2] 王建洲，陆希明.三种便潜血试验测定方法的比较[J].哈尔滨医药,2005,25(2)：1314
[3] 朱立华.实验诊断学[M].北京：北京医科大学出版社，2002，264-265
[4] 高茂馗，束国防.免疫法与化学法测定隐血的比较[J].临床检验杂志，2004，22(1)：69
[5] 李林海，黄晓燕，张云虎，等.三种粪便隐血试验试剂实验效果观察[J].临床检验杂志，2004，22(2)：113, 百拇医药(段相远)
关键词：大便潜血 邻联甲苯胺法 免疫胶体金
The Comparison Between the Chemical Method and Immunogold Method in Detecting Sedoccult Blood
Duan Xiangyuan
Abstract:Objective:To explore the comparability between the chemical method and immunogold method in detecting sed occult blood.Methods:To detect the sed occult blood of 300 specimens with both O-tolidine method and immunogold method.then analyse the results.Results:2 kinds of methods in line with the consistency of the results of the measured rate of greater than 90%.Conclusion:Food and drink impact the results of chemical method very much.so chemical method is lesssensitive and specific than immunogold method.But immunogold method also has false positivereaction，therefore we suggest detecting sed occult blood with the both two methods.
, 百拇医药
Keywords：Sed occult blood O-tolidine method Immunogold method
【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1008-1879(2012)03-0026-01
大便潜血 (fecesoccultblood,FOB)实验是临床诊断消化道出血的一项重要项目，也是普查筛选消化道肿瘤的有效手段。常用的化学法主要有联苯胺法、邻联甲苯胺法、无色孔雀绿法、愈创木脂法、匹拉米洞法等,以邻联甲苯胺法较为实用。随着近年来对粪便隐血检测试剂的深入研究,免疫法测定潜血，方便快捷并取得了较满意的结果，已逐渐取代邻联甲苯胺法。但实际工作中，某些特殊标本用胶体金试纸法检测结果与临床不符。为进一步了解粪便隐血免疫法与化学法在检测灵敏度特异性方面的特点，我们用化学法(邻联甲苯胺法)与免疫法(胶体金试纸法)测定粪便隐血结果作如下比较，探讨二者在临床上的应用价值。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 标本。测定本院300份无重复门诊及住院患者新鲜大便，均为成年人，女89例，非月经期，男211例(均排除痔肛裂出血)。患者随机分为A、B二组：A组(65例)严格按照医嘱进行饮食和药物控制3日。B组(235例)未按照医嘱进行饮食和药物控制。
1.2 试剂。艾康生物技术公司提供的便潜血胶体金检测试纸条(批号20070124)；邻联甲苯胺由上海远航试剂厂生产，冰乙酸及无水乙醇由开封化工厂生产，均为AR级。10g/L邻联甲苯胺冰乙酸试剂、3%过氧化氢自配。
1.3 方法。邻联甲苯胺法按文献操作[1]，便隐血胶体金试纸法严格按说明书操作。对收集的每份标本分别做邻联甲苯胺法和便隐血胶体金试纸检测，记录同一份二种不同方法的测定结果。邻联甲苯胺法阳性而胶体金试纸检测阴性的标本，按一定比例稀释后以胶体金法再测。
, 百拇医药 2 结果
2.1 化学法(邻联甲苯胺法)和免疫法(胶体金法)对二组检测结果的比较。见表1。
2.2 A组排除饮食及药物的影响，邻联甲苯胺法和胶体金法对A组检测结果基本一致。
2.3 B组受饮食及药物等干扰因素的影响，邻联甲苯胺法阳性率明显高于胶体金法。B组中80例化学法阳性者，胶体金法均为阴性，经咨询病史和饮食情况，除5例服用铁剂外，其他人近日曾食用动物血、肉、肝脏、及富含叶绿素食物等。其中胶体金法为阴性的2例柏油样便标本经1∶50～1∶100稀释后以胶体金法重测皆为阳性。
3 讨论
粪便隐血实验是消化道疾病辅助诊断试验。邻联甲苯胺法利用血红蛋白中的亚铁血红素具过氧化物酶活性，催化过氧化氢放出新生态氧，把受体邻联甲苯胺氧化成联甲偶氮苯而显蓝绿色。显色的深浅反映了Hb的多少，即出血量的大小。该法可检出1～5mg/L的Hb，消化道5～10ml出血即为阳性。但缺乏特异性和准确性，易出现假阳性反应，任何有类似氧化物酶活性的物质都可影响此实验，外源性动物食品如含有Hb、肌红蛋白，其含铁血红素的作用可使试验阳性；大量生食富含叶绿素蔬菜，其中含有活性的植物过氧化物酶也可催化H2O2分解出现阳性反应。邻联甲苯胺法灵敏性低于胶体金法[2]，故极少量的出血会造成邻联甲苯胺法(阴性)胶体金法(阳性)的结果。此时粪便外观通常无明显异常，但如果血红蛋白在消化道停留时间过长，或受细菌分解等因素而降解，其与胶体金试纸上包被的抗体的相应抗原受到破坏时就会出现假阴性，若此时出血量在邻联甲苯胺法检测限上就会出现邻联甲苯胺法阳性而胶体金法阴性的结果。另外当出血量大于胶体金法检测范围，随着血红蛋白含量增加，抗原抗体复合物反而减少，产生后带现象，免疫胶体金法出现假阴性，上述两种情况大便外观通常会有明显改变，只需将粪便溶液调配成一定浓度后检测，免疫胶体金法可获阳性结果。由于胶体金单克隆抗体免疫法是利用金标Hb-抗体与Hb结合后，向上扩散分别与测试区的抗-Hb抗体及对照区的Hb结合，此时胶体金的颗粒聚集呈颜色反应，它只特异地针对人-Hb抗原表位，基本排除了饮食及药物因素的干扰；且具有很好的灵敏度，一般Hb为0.2mg/L就可得到阳性结果[3-4]。被世界卫生组织(WHO)和世界胃肠镜检查协会推荐作为粪便隐血实验的一种较为确认的方法[5]，且对操作者无损害，但其成本较化学法高。
, 百拇医药
鉴于两种方法各有优缺点，有条件的实验室应同时开展两种方法：二者皆为阳性判断为真阳性；化学法阳性而免疫胶体金法阴性者，若外观无改变者建议禁肉食、富含叶绿素食物、停用某些已知有影响的药物2 d～3 d后复查，若外观有所改变者稀释重测免疫胶体金法；若化学法阴性而免疫胶体金法阳性者建议连续复查2次及做进一步检查。
参考文献
[1] 叶应妩，王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京:东南大学出版社,2006.310-311
[2] 王建洲，陆希明.三种便潜血试验测定方法的比较[J].哈尔滨医药,2005,25(2)：1314
[3] 朱立华.实验诊断学[M].北京：北京医科大学出版社，2002，264-265
[4] 高茂馗，束国防.免疫法与化学法测定隐血的比较[J].临床检验杂志，2004，22(1)：69
[5] 李林海，黄晓燕，张云虎，等.三种粪便隐血试验试剂实验效果观察[J].临床检验杂志，2004，22(2)：113, 百拇医药(段相远)