RNA干扰技术抑制肺癌细胞外源性绿色荧光蛋白的表达
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王昌明 王绩英 曾锦荣 莫碧文 蒋明 林云 韦江红 桂林医学院附属医院呼吸内科;
【摘要】目的:构建针对绿色荧光蛋白(GFP)基因的发夹结构RNA(small hairpin RNA,shRNA)表达载体(pshRNA-GFP),观察对肺癌A549细胞的GFP特异性抑制作用。方法:设计针对GFP基因的shRNA序列,构建pshRNA-GFP质粒。与报告基因质粒PEGFP-N1共转染A549细胞,分别用激光共聚焦扫描显微镜(Laser confocal scanning micro-scope,LCSM)和流式细胞术检测干扰效果。结果:瞬时共转染pshRNA-GFP质粒和PEGFP-N1质粒后,荧光显微镜观察结果显示A549细胞中发出荧光的细胞数量减少,荧光强度明显降低。流式细胞术检测阳性细胞百分率降低至32.4%,差异有显著性。结论:靶向GFP的shRNA表达质粒能有效而特异抑制GFP在A549中的表达,A549细胞中存在RNA干扰现象。
【关键词】 RNA干扰 肺癌 绿色荧光蛋白
【基金】广西科技厅自然科学基金资助项目(桂科自0542111) 广西卫生厅重点科研课题资助项目(重200531)
【分类号】R734.2
RNA干扰(RNAi)现象是1998年Fire和Mello首次在秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)中发现并证明属于转录后水平的基因沉默机制[1-3]。是由dsRNA(Double-stranded RNA)介导的基因阻抑现象,由于这是一种在RNA水平的基因表达抑制,故称为RNA干扰,简称RNAi。RNAi技术的发展已经成为
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摘要：目的：构建针对绿色荧光蛋白(GFP)基因的发夹结构RNA(stoall halrpin RNA，shRNA)表达载体(pshRNA—GFP)，观察对肺癌A549细胞的GFP特异性抑制作用。方法：设计针对GFP基因的shRNA序列，构建pshRNA—GFP质粒。与报告基因质粒PEGFP-N1共转染A549细胞，分别用激光共聚焦扫描显微镜(Laser confocal scanning micro—scope，LcsM)和流式细胞术检测干扰效果。结果：瞬时共转染pshRNA-GFP质粒和PEGFP—N1质粒后，荧光显微镜观察结果显示A549细胞中发出荧光的细胞数量减少，荧光强度明显降低。流式细胞术检测阳性细胞百分率降低至32.4%，差异有显著性。结论：靶向GFP的shRNA表达质粒能有效而特异抑制GFP在A549中的表达，A549细胞中存在RNA干扰现象。
关键词：RNA干扰；肺癌；绿色荧光蛋白
中图分类号：R392；R734.2 文献标识码：A 文章编号：1008—2409(2008)06—1053—03
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