1.1.2 健康对照(HC)组 共105例,男50例,女55例;年龄(54.27±10. 13)岁,为健康体检 者,排除了糖尿病､高血压､冠心病和肥胖及相应疾病的家族史。以上全部研究对象均来自 广西桂北地区汉族人群,且无血缘关系。

    1.2 研究方法

    1.2.1 引物设计与合成 参照有关文献设计一对引物[6],由北京 赛百盛有限公司合成。用 于特异性扩增IL-6基因包含-572位点的一段DNA引物序列,上游引物为:5’-GGAGACGCCTTGAAGTAACTGC-3’;下游引物为:5’-GAGTTTCCTCTGACTC CATCGCAG-3’。

    1.2.2 人类基因组DNA提取 参照已建立的改良碘化钠法。取全血200μl加 无菌双蒸水100μ l混匀,加6mol/L碘化钠 200μl 颠倒混匀2 min(勿震荡),加等体积氯仿/异戊醇(24:1 ) 混匀,漩涡震荡3 min,15000rpm离心15 min,取上清液加240μl 纯异丙醇混匀,室温(或 4℃)静置15 min,15000rpm离心15 min,弃上清,沉淀用37%异丙醇或70%乙醇洗涤3次,自 然晾干,加50μl TE缓冲液溶解,经紫外分光光度计定量后于-70℃冻存备用。

    1.2.3 聚合酶链反应基因扩增 IL-6的PCR扩增反应体系为25μl,其中含 10×PCR Buffer 2 .5μl,2.5mmol/LdNTPs2.0μl,引物P1､P2各20pmol,模板DNA 5.0μl,TaqDNA聚合酶1 .25U,不足体积用灭菌双蒸水补足至25μl ......