ＶＥＧＦ基因体外转染大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究
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郑岩 易成刚 郭树忠 刘丹 黄博 夏炜 潘华 隋继强 第四军医大学西京医院全军整形外科研究所 第四军医大学西京医院全军整形外科研究所 第四军医大学西京医院全军整形外科研究所 第四军医大学西京医院全军整形外科研究所 第四军医大学生化教研室 第四军医大学西京医院全军整形外科研究所 第四军医大学西京医院全军整形外科研究所 第四军医大学西京医院全军整形外科研究所
【摘要】目的:探讨脂质体介导血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSCS)应用于基因治疗的可行性、安全性。方法:体外分离、培养、鉴定MSCs,PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒转染MSCs,转染后用免疫荧光和ELISA检测MSCs表达VEGF蛋白的情况,MTT检测MSCs对VEGF质粒转染的敏感性。结果:骨髓中分离得到MSCs,流式细胞检测显示MSCs不表达CD34和CD45,但表达CD90。透射电镜观察可见细胞浆中含大量粗面内质网和分泌颗粒。VEGF基因转染MSCs后第5天抗VEGF免疫荧光染色约90%的MSCs呈阳性,ELISA检测结果显示PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒转染组细胞培养上清液中VEGF含量明显高于对照组,并于转染后第5天达到峰值。MTT检测结果显示VEGF质粒转染对MSCs增殖无影响。结论:MSC可作为VEGF基因转染的靶细胞用于基因治疗。
【关键词】 大鼠骨髓间充质干细胞 血管内皮细胞生长因子 基因治疗
【基金】国家自然科学基金面上项目青年科学基金资助项目(30400471)
【分类号】Q78
目前研究发现,体外培养的骨髓间充质干细胞(MSCs)[1-2]和血管内皮生长因子(VEGF)的基因治疗都有明显的促进组织血管新生的作用[3-4]。本实验拟通过VEGF165基因体外转染MSCs,使MSCs高表达VEGF,旨在探索基因细胞联合治疗缺血性疾病适宜的细胞载体。1材料PcDNA3.1(-)/VEGF165质
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[摘要]目的：探讨脂质体介导血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSCS)应用于基因治疗的可行性、安全性。方法：体外分离、培养、鉴定MSCs，PcDNA3.1(-)/VEGF165质粒转染MSCs，转染后用免疫荧光和ELISA检测MSCs表达VEGF蛋白的情况，MTT检测Mscs对VEGF质粒转染的敏感性。 结果：骨髓中分离得到MSCs，流式细胞检测显示MSCs不表达CD34和CD45，但表达CD90。透射电镜观察可见细胞浆中含大量粗面内质网和分泌颗粒。VEGF基因转染MSCs后第5天抗VEGF免疫荧光染色约90%的MSCs呈阳性，ELISA检测结果显示PcDNA3.1(-)/VEGFl65质粒转染组细胞培养上清液中VEGF含量明显高于对照组，并于转染后第5天达到峰值。MTT检测结果显示VEGF质粒转染对Mscs增殖无影响。 结论：MSC可作为VEGF基因转染的靶细胞用于基因治疗。
[关键词]大鼠骨髓间充质干细胞；血管内皮细胞生长因子；基因治疗
[中图分类号]Q813.1 [文献标识码]A [文章编号]1008—6455(2006)09—998—03
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