不同冻存方法对组织工程骨生物活性的影响(1)

http://www.100md.com 2007年2月1日 蓝 旭 梁 军 葛宝丰 刘雪梅

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     [摘要]目的：了解不同冻存方法对组织工程骨生物活性的影响。方法：以骨髓基质干细胞(ma¨ow stromal cell s，MsCs)复合部分脱蛋白骨培养制备组织工程骨，实验分为A组：组织工程骨用添加冻存保护剂的保存液保存；B组：组织工程骨用不添加冻存保护剂的保存液保存；c组：组织工程骨未行低温保存；D组：单纯Mscs培养。A组和B组的组织工程骨于一196℃的液氮中冻存3个月，3个月后复温冻存的组织工程骨。用倒置相差显微镜和扫描电镜观察Mscs的粘附和分布情况、检测细胞活力和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性、流式细胞仪分析细胞周期。结果：Mscs在材料表面和孔隙内均可粘附和分布，粘附于材料的细胞活力大小依次为：c组>A组>B组 (PA组>B组(P6/ml密度接种于含15%胎牛血清的DMEM培养液中，于37℃、5%C0₂饱和湿度条件下培养。待细胞相互融合达90%生长面积时用0.25%胰蛋白酶(Sigma公司)消化传代培养。细胞传至3代时，移入含l×10^-8mol/L地塞米松、50mg/L维生素C和l×10^-2mol/L B-磷酸甘油钠的DMEM培养液诱导培养3天 ......

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