PBS冲洗3次。除去PBS后，于玻片上滴加1滴DAB显色剂，在光镜下观察染色情况，以阳性反应着色最强而背景开始染色为度，自来水冲洗。系列酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。其中以PBS代替一抗样本作为空白对照。

    3 结果

    3.1 脐血间充质干细胞的分离与扩增

    3.1.1 MSC的原代培养：将脐血分离后获得的单个核细胞接种于一次性塑料培养瓶，48h后可见贴壁细胞出现，这些细胞在形态上呈现非均一性，有大而多核的破骨样细胞和呈纺锤形或长梭形的成纤维样细胞。随着培养时间的延长，贴壁细胞增多。经过约3周的培养，成纤维样细胞增殖可达约60%融合，细胞排列有一定方向性。

    3.1.2 脐血MSC传代培养：原代贴壁细胞长成60%融合后，用0.25%胰蛋白酶-0.01%EDTA消化，1：1传代。细胞在接种后呈圆形，折光性好。2h后开始贴壁，12h后贴壁细胞可达到90%以上，并逐渐伸展；传代后细胞均匀散在分布，生长迅速，不再形成集落；接种2天后即开始增殖，约10天左右可达到80%融合。随着进一步的传代过程，其他细胞逐渐被去除，贴壁细胞呈均一的长梭形，增殖加快，1周左右即可达80%-90%融合。

    3.1.3 传代MSC的生长曲线：传代的P3代细胞和冻存复苏后的P3代细胞相比较，冻存组细胞的细胞活性和增殖能力均较未冻存细胞略有降低。冻存组细胞在复苏后，细胞数量有所减少。生长曲线显示，冻存组细胞潜伏期增长 ......