针对SP1的圈套寡脱氧核苷酸抑制NIH3T3细胞活力和Ⅲα1胶原基因表达的研究

http://www.100md.com 2008年2月1日 张世新　杨松林　万伟东　史　毅　邓辰亮　金由辛

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     [摘要]目的：研究针对转录因子SP1的圈套寡脱氧核苷酸(Decoy-oligodeoxynucleotidc，Decoy-ODN)对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)的活力和Ⅲα₁胶原基因表达的影响，探讨圈套寡脱氧核苷酸用于病理性瘢痕基因治疗的可能性及机理。方法：设计合成针对SP1的特异性哑铃形Decoy-ODN。用阳离子脂质体转染NIH₃T₃细胞。分别用流式细胞仪检测ODN转染效率，激光共聚焦显微镜观察ODN在细胞中的分布，电泳迁移率变动分析(electrophoretic mobility shift assay，EMSA)验证ODN与SP1的特异性结合。用SWT-8检测ODN对细胞活力的影响。用RT-PCR检测ODN对细胞胶原基因表达的抑制作用。结果：分别转染25nM、50nM、100nM、150nM SP1 Decoy-ODN，48h后，细胞活力依次为0.9 331±0.0203、0.7479±0.0868、0.577±0.034 7、O.4703±0.01 47；转染100nM SP1 Decoy-ODN可明显抑制Ⅲα₁胶原mRNA的表达(P<0.01)，抑制效果达60%。结论：Decoy-ODN可以通过拮抗核转录因子SP1的活性而抑制NIH₃T₃细胞的活力和Ⅲα₁胶原基因的表达。

    [关键词]圈套寡脱氧核苷酸(Decoy-ODN)；转录因子SP1；细胞活力；Ⅲα₁胶原；成纤维细胞

    [中图分类号]Q813 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455(2008)02-05

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