局部用雷帕霉素聚乳酸乙醇酸共聚物缓释微球的制备及释药研究(2)
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1.3 微球形态观察及粒径检测:取Rapa-PL GA-MS样品3份均匀涂布于盖玻片,真空干燥,喷涂金粉,扫描电镜观察Rapa-PLGA-MS的形态。选取Rapa-PL GA-MS 6个样本,每个样本含微球不少于250个,同样方法进行扫描电镜检测其粒径大小,计算微球的平均粒径。
1.4 雷帕霉素含量测定
1.4.1 色谱条件:流动相:乙腈/水(75/25);等度洗脱;紫外检测波长278 nm;流速1 ml/min;柱温40℃;样品温度25℃;进样量:20μl[6]。
1.4.2 标准曲线的绘制:精密称取雷帕霉素对照品24mg, 置于10 ml 容量瓶中,用乙腈溶解并定容,得到2400μg/ml 雷帕霉素对照品储备液。将雷帕霉素对照品储备液用乙腈逐级稀释,分别得到24、12、6、3、1.5、0.75μg/ml 对照品标准曲线系列溶液,进样并记录色谱图,以峰面积(AU)对溶液质量浓度(ρ,μg/ml )作线性回归,得到回归方程。
1.5 精密度和回收率实验:分别配制质量浓度20μg/ml、5 μg/ml、1μg/ml的雷帕霉素对照品溶液,采用上述色谱条件,进样分析。分别在1天内重复测定5次计算日内精密度(intra-RSD),连续测定3天计算精密度日间(inter-RSD)。将测得的峰面积代入标准曲线计算雷帕霉素含量,将计算所得值除以已知含量即得到方法回收率。
1.6 包封率与载药率的测定:取样品7.7mg,加入1ml乙腈,将此溶液超声震荡5min,涡旋混匀30min,静置后取上清进样,按照1.4.1所述色谱条件进行检测,记录峰面积代入线性回归方程计算雷帕霉素的含量,并按照下式计算载药量和包封率。
载药率=样品测定浓度×样品体积/取样质量×100%
包封率=样品测定浓度×样品体积/样品中雷帕霉素含量的理论值×100%
1.7 雷帕霉素微球体外释药的研究:本试验以pH 7.4 磷酸盐缓冲液为溶出介质。精密称取Rap-PLGA-MS15 mg,用2 ml pH 7.4磷酸盐缓冲液(含0 ......
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