糖尿病创面表皮干细胞增殖分化相关蛋白的研究(1)
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[摘要]目的:表皮干细胞(epidermal stem cells,ECMs)是皮肤发生、修复、重塑的关键性因素。研究糖尿病创面中ECMs增殖分化相关蛋白-角蛋白19(keratin19,K19)及β1整合素(β1-integrin)的表达,探讨ECMs在糖尿病创面修复中的作用及意义。方法:采用免疫组化SP法检测角蛋白19及β1整合素在各年龄组糖尿病患者创面及正常人全厚皮肤组织中的表达水平。结果:糖尿病患者创面各组角蛋白19及β1整合素的阳性表达分别为81.73±15.31、22.32±5.42,均低于正常人组(P<0.05)。结论:糖尿病患者创面皮肤组织中ECMs数量少、增殖分化能力差可能是导致糖尿病创面难以修复的重要原因之一。
[关键词]表皮干细胞;糖尿病创面;角蛋白19;β1整合素;免疫组化
[中图分类号]Q813.1 [文献标识码]A[文章编号]1008-6455(2010)08-1171-02
Study on related protein of proliferation of epidermal stem cells in diabetic wound
LI Yong-tao1,WANG Xi-mei1,QIAO Xiao-jun2,YUAN De-pin1,TANG YIN-ke1
(1.Department of Plastic Surgery, 2 Department of Neuro Surgery,the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,Henan,China)
Abstract:ObjectiveEpidermal stem cells are the optimizing key factors in processing of skin endermic,repair and remoulding.To investigate the expression of related protein of proliferation of epidermal stem cells -keratin19,β1-integrin in diabetic wound, and discuss epidermal stem cells' role and significance in diabetic wound.MethodsSP immunohistochemical method was used to detect the expressions of keratin19 and β1-integrin in different age group of diabetics wound and normal skin tissue. ResultsThe positive rates of keratin19 and β1-integrin in different age group of diabetics'wound were 81.73±15.31,22.32±5.42 and were lower compared with the group of normal skin tissue(P<0.05).ConclusionThe decreased amount and the low proliferation and differentiation capacity of ECMs may be one of the important mechanisms of different recovering diabetic wound.
Key words: epidermal stem cells;diabetic wound;keratin19;β1-integrin;immunohistochemistry
表皮干细胞(epidermal stem cells,ECMs)作为皮肤组织具有多向分化潜能的干细胞,是皮肤发生、创面修复和重塑的关键。近年来常采用具有相对较高特异性的角蛋白19及β1整合素同时染色阳性来标记[1-2]。糖尿病(diabetes mellitus,DM)患者皮肤易受损伤, 且损伤后创面愈合延迟或不愈合。DM 创面难愈的机制很复杂, 目前对其研究颇多[3-4]。但是,从表皮干细胞角度去探讨糖尿病创面难愈的研究报道甚少。本实验通过对糖尿病患者和正常人全厚皮肤组织中角蛋白19和β1整合素的表达进行检测,探讨表皮干细胞在糖尿病创面中的表达及其在正常皮肤中的差异,推测表皮干细胞对糖尿病创面修复的影响。
1材料和方法
1.1 标本来源:标本来自2008.7～2010.3郑州大学第一附属医院整形外科手术患者。其中糖尿病患者创面手术后剩余全厚皮肤组织30例,男12例,女18例,年龄45岁～60岁,病程1年～10年,分别取材于足部、小腿;正常皮肤为美容手术切除的全厚皮肤组织,共30例,男10例,女20例,年龄35～60岁。所有患者均无皮肤疾病、结缔组织病、传染病、恶性肿瘤和其他重要脏器疾病,术前无放疗、激光治疗及免疫治疗史。标本用10%的甲醛固定,常规石蜡包埋,4μm连续切片。
1.2 主要试剂及方法:角蛋白19抗体、β1整合素抗体、免疫组化SP试剂盒、DAB 显色剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。实验严格按照SP 染色试剂盒说明书进行操作。角蛋白19及β1整合素一抗工作浓度均为1:100。取已知阳性对照切片作为阳性对照,PBS代替一抗作为阴性对照。
1.3 结果判定标准:在400倍光镜下观察免疫组化结果,β1整合素细胞膜染成棕黄色为阳性细胞,角蛋白19细胞浆染成棕黄色为阳性细胞。两组均见阳性细胞表达,随机选取20个视野,每视野观察100个细胞,记录阳性细胞数并计算阳性细胞率。
1.4 统计学处理:用SPSS16.0 软件包对所有数据进行统计学处理,所有数据均以x±s形式表示,两组之间比较采用χ2检验,P﹤0 ......
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