胶原三肽对B16黑素瘤细胞黑素合成的影响
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[摘要]目的：研究胶原三肽对B16黑素瘤细胞的影响，探讨其美白作用与机制。方法：本文以B16黑素瘤细胞作为受试细胞，以浓度为10μg/ml曲酸作为阳性对照，研究胶原三肽对其增殖、细胞内酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响。结果：胶原三肽浓度范围为50～400μg/ml时对B16黑素瘤细胞增殖无明显影响，但均能显著抑制黑色素合成。且400μg/ml胶原三肽抑制酪氨酸酶活性具有极显著性。结论：胶原三肽具有一定的美白功能。
[关键词]胶原三肽；B16黑素瘤细胞；黑色素合成；酪氨酸酶活性；细胞增殖
[中图分类号]739.5[文献标识码] [文章编号]1008-6455(2011)06-0939-03
Effect of collagen tripeptide on melanogenesis in B16 melanoma cells
CHENG Jing1, CHEN Dong-liang1,JIANG Xue-qiong2,CHEN Da-wei2,YANG Guo-yan1,TANG Liang-yan2,WANG A-jing1
(1.Wuhan Peptide Substance Research Institute,Wuhan 430023,Hubei,China;2.Wuhan Hopsun Biological Product Inspection Co.,LTD)
Abstract:ObjectiveTo study the effects of collagen tripeptide on B16 melanoma cells.MethodsThe cell proliferation, the tyrosinase activity and the melanin content were detected, using kojic acid as stnadard control.ResultsThe results showed there were no perceptible effect on B16 cell proliferation, but melanin was decreased significantly by the concentrations of collagen tripeptide from 50μg/ml to 400μg/ml. The tyrosinase activity was inhibited remarkably by 400μg/ml collagen tripeptide.ConclusionCollagen tripeptide could inhibit melanogenesis in B16 melanocytes obviously.
Key words: collagen tripeptide(CTP);B16 melanoma cells;melanogenesis;tyrosinase activity;cell proliferation
人类皮肤的颜色主要取决于黑色素的含量与分布，而黑色素细胞的结构功能和数量直接影响皮肤中黑色素的含量。传统的美白化妆品采用过氧化氢，氯化氨基汞以及各种酚类衍生物等能使黑色素组织迅速分解，但其对皮肤具有腐蚀性，细胞毒性和过敏性，目前许多国家已禁用此类物质[1]。因此，寻找新的安全的美白产品是极为迫切的。
研究表明[2]，胶原肽具有安全性高、细胞粘结性好、透明、无臭和无刺激等特点，可作为化妆品原料。陈龙等[3]发现鱼胶原肽具有抑制酪氨酸酶活性功能，且抑制能力远高于市场上的同类产品。王静凤等[4]发现鱿鱼皮胶原蛋白多肽具有降低黑色素含量、抑制酪氨酸酶活性以及下调酪氨酸酶mRNA表达的功能。王奕等[5]发现日本刺参胶原肽具有促进B16细胞增殖，抑制黑色素合成和酪氨酸酶活性，下调酪氨酸酶mRNA表达的功能。
胶原三肽(collagen tripeptide CTP)是组成胶原的最小单位，其结构可表示为﹝Gly-x-y﹞是一种N端带有甘氨酸的高纯度三肽。胶原三肽平均分子量约为280Da。研究发现，胶原三肽具有优异的保湿效果和渗透性，同时还能够促进胶原和透明质酸的合成[6]。
本研究以胶原三肽为研究对象，探讨其对B16黑素瘤细胞黑素合成，酪氨酸酶活性以及细胞增殖的影响。
1材料和方法
1.1材料
1.1.1小鼠B16黑素瘤细胞株：购于武汉博士德生物工程有限公司，于RPMI1640培养液(含10%小牛血清，105U/L青霉素，105U/L链霉素)、37℃、5%CO2培养箱中培养，每3天传代一次。
1.1.2胶原三肽：由武汉天天好生物制品有限公司提供。
1.1.3主要药品和仪器：RPMI1640培养液、胰酶、无菌PBS(武汉博士德生物工程有限公司)，L-DOPA(sigma)，MTT(sigma)，脱氧胆酸钠(分析纯)，DMSO(分析纯)，6孔板(武汉博士德生物工程有限公司)，96孔板(武汉博士德生物工程有限公司)，细胞培养瓶(武汉博士德生物工程有限公司)，10ml具塞试管(武汉博士德生物工程有限公司) ......
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