组织工程骨-软骨复合组织种子细胞的获取与培养(3)
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原代培养的BMSCs一般在24～48h内贴壁，通过换液及PBS冲洗去除悬浮生长的造血系细胞，传代时利用BMSCs较易脱落，其他细胞贴壁性较强的特点，采用消化时间控制纯化BMSCs。原代细胞首次融合时间需要7～10天，本实验所获的BMSCs贴壁能力较强，细胞呈均一的成纤维细胞形态，为梭形、三角形。目前研究没有找到BMSCs的特异性标记物，BMSCs能够表达CD44、CD68、CD77和CD90，而不表达CD34、CD45等造血细胞的特异性标志物。从本实验所培养的细胞形态看，采用全骨髓贴壁法培养纯化的细胞在十代内生长状态稳定，梭形贴壁生长，呈均一的成纤维细胞形态，在对数生长期群体倍增时间约为48h，传代周期约为5～7天。所获得的BMSCs能稳定传代十代以上，说明采用本方法获得的细胞经多次传代后能够纯化，适应能力强，增殖速度快，可以满足一般的实验要求。在体外培养扩增得到大量细胞同时，可见少量BMSCs自动分化。随着细胞传代超过十次以上，BMSCs出现衰老表现。因此，如何保持BMSCs的体外长期增殖和未分化状态仍是干细胞研究的重点和难点。
软骨细胞及BMSCs在体内的增殖和分化受多种因素影响，各因素之间相互形成一个复杂的网络，完全模拟体内作用机制在体外培养细胞，短时间内还难以实现。本实验通过对软骨细胞及BMSCs的获取和传代培养，可以获得大量的目的细胞，这两种细胞作为组织工程骨-软骨复合组织的种子细胞是可行的，为今后进一步进行诱导分化、组织构建及后续的体内移植实验奠定了实验基础。
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