中波紫外线对人血小板线粒体DNA影响的初步观察(1)
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[摘要]目的：观察中波紫外线对人血小板线粒体活性及线粒体DNA的影响，探讨其作为评测光损伤敏感系统的可行性。方法：以不同能量的中波紫外线照射人血小板，观察血小板线粒体活性及线粒体DNA光化产物环丁烷嘧啶二聚体(CPDs)含量的变化。结果：接受不同能量中波紫外线照射的血小板，线粒体活性明显降低(P<0.05)，环丁烷嘧啶二聚体(CPDs)含量则明显增加(P<0.05)。结论：人血小板线粒体活性与环丁烷嘧啶二聚体含量对中波紫外线的照射敏感，并与其剂量呈依赖关系，可很好反映中波紫外线对生物体光损伤作用。
[关键词]中波紫外线；人；血小板；线粒体DNA；环丁烷嘧啶二聚体
[中图分类号]Q591.3 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455(2012)05-0756-03
The efficacy of ultroviolet B irradiation to mitochondria DNA of human platelets
HUANG Mao-fang1,3,LIU Zhong-rong2,YANG Hui-lan2,ZHANG Ling1,2,XUE Li-zhang2,ZHANG Fa-zhou2
(1.Graduate Institute of Southern Medical University,Guangzhou 510515,Guangdong,China;2.Department of Dermatology,the General Hospital of Guangzhou Military Command;3.Guangzhou Dermatitis Preventive Institute)
Abstract: Objective To investigate whether human platelets could be applied on photoaging research. Methods After human platelets were irradiated with different doses of ultroviolet B, changes of mitochondria activity and cyclobutane pyrimidine dimmers(CPDs)in mitochondria DNA were observed. Results Change of mitochondria activity had significant difference(P<0.05), and content of CPDs in mitochondria DNA increased with doses of UVB. differences were statistical significance (P<0.05). Conclusion Preliminary study deduce that mitochondria activity and content of CPDs in mitochondria DNA were sensitive to different doses of UVB, and human platelets can be applied on photic injury research.
Key words:ultroviolet B;human; platelet; Mitochondria DNA; activity;cyclobutane pyrimidine dimmers
血小板是巨核细胞的衍生物，成熟的血小板内无细胞核而含有线粒体及线粒体DNA(mtDNA)[1]。线粒体内缺乏DNA损伤修复的酶系统，并且进行复制时所需要的DNA聚合酶是由核DNA编码的，因此一旦没有细胞核的血小板的mtDNA受损，损伤所致的mtDNA损伤可以很好的保留下来[2]。根据这一特点，我们认为mtDNA很可能可以作为体外评价紫外线光损伤作用的敏感系统。本实验以人血小板为研究对象，发现中波紫外线照射下血小板线粒体活性及线粒体DNA出现了变化。
1 材料和方法
1.1 材料：新鲜血小板由广州军区广州总医院输血科提供，来源于经常规检测为正常的健康志愿者献血的机采样本9份。
1.2 实验试剂与仪器：动物线粒体提取试剂盒(GENMED公司)，Mito-Tracker Green线粒体绿色荧光探针(碧云天生物技术研究所)，5% 牛血清蛋白(Sigma)，环丁烷嘧啶二聚体单克隆抗体(sigma公司)，兔抗小鼠-HRP标记抗体(SouthernBiotech)。日光模拟器(上海希格玛高科技有限公司，UV-100)，超级酶标仪(Bio Rad，MXLEL 680)，荧光显微镜(Leica，DMI6000B)。
1.3实验方法：收集新鲜血小板30～40ml。以PBS溶液稀释新鲜血小板至5×1011/L，分成实验组与对照组，其中实验组按2ml/孔置于24孔板，以日光模拟器发射的UVB作为光源照射1min，对照组不经照射处理。本实验观察在不同能量作用下，照射前后血小板线粒体活性及线粒体DNA的变化。
1.4 检测方法
1.4.1 中波紫外线照射剂量：以当日所测的UVB能量进行照射，实验使用的中波紫外线能量见表1 ......
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