窄谱中波紫外线对自体黑素细胞移植治疗白癜风疗效影响的研究(1)
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[摘要]目的：评价不同方式联合窄波UVB照射对于自体黑素细胞培养移植治疗白癜风疗效的影响。方法：将符合纳入标准的稳定期白癜风患者随机分为四组，A组：移植前进行窄波UVB照射20次；B组：移植后予窄波UVB照射30次；C组：移植前予窄波UVB照射20次，移植后再予窄波UVB照射30次；D组：仅进行自体黑素细胞移植，未照射窄波UVB。治疗后至少随访6个月观察复色效果。结果：共治疗221例白癜风患者，移植前后均照光组48例，有81.3%的患者获得90%～100%的复色，获得50%以上复色率的患者达93.8%；移植前照光组54例患者的痊愈率为68.5%，有效率为92.6%；移植后照光组63例患者的痊愈率为61.9%，有效率为88.9%；仅移植未照光组56例，仅有44.6%的患者获得90～100%的复色，获得50%以上复色率的患者为73.2%。四组的痊愈率和有效率均有统计学差异。结论：体外培养的自体黑素细胞移植治疗稳定期白癜风疗效肯定，用少量供皮区即可治疗大面积皮损，联合窄波UVB治疗可显著提高疗效，其中移植前后均进行窄波UVB照射者效果最佳。
[关键词]白癜风；黑素细胞；移植；窄波UVB
[中图分类号]R758.4+1 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455(2012)08-1360-03
白癜风是一种常见的色素脱失性疾病，病因复杂，治疗困难。对于活动期的白癜风，可选择药物治疗包括外用和口服皮质激素，免疫调制剂，维生素D衍生物，系统或局部的光化学疗法，窄波UVB及308nm准分子激光[1]。而稳定期白癜风对于传统方法治疗大多无效，可考虑采用外科手段治疗。自体黑素细胞培养移植是治疗稳定期白癜风的一种有效方法，通过体外培养扩增黑素细胞数量可用于较大面积皮损的治疗，近年来国内外已有大量文献报道[2-5]。联合窄波紫外线照射能通过促进黑素细胞增殖和迁移而促进移植区域复色[1]，笔者在以往的研究中发现自体黑素细胞培养移植联合窄波UVB照射能明显提高移植疗效[6]。为了比较不同方式联合窄波UVB照射对于自体黑素细胞培养移植疗效的影响，笔者进行了一项大样本随机对照研究，结果报道如下。
1 资料和方法
1.1病例：病例入选标准：均符合中国中西医结合学会皮肤性病专业委员会色素病学组制定的白癜风诊断标准[7]，病期参照VIDA评分标准[8]，均为稳定期患者，病情稳定时间均6个月以上，对常规的局部和系统治疗无反应，无瘢痕体质以及无严重的自身免疫性疾病，患者均无紫外线照射的禁忌证。将患者随机分为四组，A组：窄波UVB照射20次后进行自体黑素细胞移植；B组：自体黑素细胞移植后予窄波UVB照射30次；C组：移植前予窄波UVB照射20次，移植后再予窄波UVB照射30次；D组：仅进行自体黑素细胞移植，未照射窄波UVB。共治疗221例白癜风患者，其中男性104例，女性117例，年龄5～55岁(平均年龄23.1±10.5岁)；平均病程3.9年；节段型40例，寻常型181例。其中A组54例，B组63例，C组48例，D组56例。所有患者均经知情同意，试验方案经本院伦理委员会讨论通过。
1.2 试剂和仪器：F12基础培养基、胎牛血清、谷氨酰胺、庆大霉素、0.25%胰酶、0.02%EDTA、0.05%胰酶-EDTA、D-Hank′s液、基因素均购自美国Gibco公司，霍乱毒素(CT)、异丁基甲基黄嘌呤(IBMX)、二甲基亚砜(DMSO)、L-多巴、内皮素-1(ET-1)、黑色素均购自美国Sigma公司，人重组碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)购自英国Pepro-Tech公司。倒置显微镜和立体显微镜为日本Olympus产品，超脉冲二氧化碳激光机为美国科医人公司产品，分光光度计为美国BIO-RAD公司产品。
1.3方法
1.3.1窄波UVB治疗：起始剂量为0.4J/cm2，每周2次，每次照射剂量根据患者的反应和耐受能力递增20%，但不超过3J/cm2。B组和C组患者在移植后2周开始照射窄波UVB。
1.3.2自体黑素细胞培养和移植
1.3.2.1 取皮：使用表皮分离吸疱仪在白癜风患者腹部正常皮肤处吸疱4个(负压40kPa，时间60～90min)，用虹膜剪沿水疱壁边缘剪下疱壁，置于Hanks'液中立即送入细胞实验室分离细胞。
1.3.2.2 黑素细胞培养：按文献所述方法进行黑素细胞的分离和培养[2]。
1.3.2.3 黑素细胞移植：将复方利多卡因软膏涂于移植区皮肤表面作局部麻醉，用超脉冲二氧化碳激光(能量225mJ/s)去除表皮层。将黑素细胞悬液均匀地接种在去除表皮层的移植区，无菌凡士林纱布覆盖，外敷含F12培养液的湿纱布，包扎固定。嘱咐患者平卧休息1h，7～10天后去除纱布。
1.4 统计学分析：使用SPSS13.0统计软件进行统计学分析，各组间差异比较采用χ2检验。
2 结果
2.1 移植1个月后80%皮损有明显的色素产生，只有20%皮损2个月后才产生色素。联合窄波UVB治疗的患者出现色素时间早于未照射窄波UVB者。5%的患者治疗区域起初有轻微的色素过深，但随着时间的推移逐渐变淡，6个月后移植部位的色素与正常皮肤无明显差别。5例患者在窄波UVB照射后出现皮肤灼热感，15例患者出现皮肤干燥、瘙痒，12例患者出现红斑。所有病例均跟踪观察疗效至少6个月，最长者随访24个月，未见瘢痕及其他不良反应，产生的色素无脱失。
3 讨论
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