点阵CO2激光和Nd：YAG激光对自然老化小鼠真皮重塑的比较研究(1)
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[摘要]目的：比较点阵CO2激光和Nd：YAG激光(准长脉宽1 064nm波长)对老化昆明小鼠真皮重塑的作用，并探讨二者嫩肤作用机制，为临床选择治疗方法提供理论依据。方法：应用两种波长激光照射自然老化昆明小鼠背部脱毛皮肤，通过HE染色进行成纤维细胞计数及真皮厚度测量，饱和苦味酸-天狼猩红染色观察皮肤Ⅰ型、Ⅲ型胶原纤维的表达及Gomori醛品红染色观察弹力纤维的变化。结果：两组照射组中真皮厚度、成纤维细胞计数和弹力纤维容积分数的值均高于正常对照组(P均<0.05)；点阵CO2激光组均高于Nd：YAG激光(准长脉宽1064nm波长)组(P均<0.05)；两组照射组中Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白容积分数均高于正常对照组(P均<0.05)，但照射两组间差别无统计学意义。结论：点阵CO2激光和Nd：YAG激光(准长脉宽1064nm波长)均可引发小鼠真皮重塑，前者效果优于后者。
[关键词]点阵CO2激光；Nd：YAG激光(准长脉宽1064nm波长)；自然老化小鼠；真皮重塑
[中图分类号]R616.4 R332 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455(2012)10-0-0
激光医学的迅速发展，已经广泛地应用于皮肤科的临床实践中。近几年，非剥脱性激光以及点阵激光的发展更为迅速，已经占有了一席之地[1-2]。虽然有关两者作用机制的研究也有报道[3-4]，但是二者针对皮肤组织结构作用机制的比较研究却鲜见报道。通过对二者作用的靶组织或细胞变化的深入比较研究，可以进一步揭开二者作用差异的面纱，为临床制定具体治疗方法提供理论依据。因此，本实验旨在分析点阵CO2激光及Nd：YAG激光(准长脉宽1 064nm波长)对昆明小鼠真皮的影响并进行对比研究，以进一步明确其作用机制的差异。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物：清洁级雌性自然老化昆明小白鼠24只，体重(45±7)g，鼠龄11～12个月，由西安交通大学医学院实验动物中心提供。
1.1.2仪器设备：点阵CO2激光治疗仪(上海康奥)，Nd：YAG激光(准长脉宽1 064nm波长)(韩国Lutronic S6)；石蜡切片机(德国Leica)；偏振光显微镜(奥林巴斯)；光学显微镜及医学图像分析系统(麦克奥迪)。
1.2 实验方法：10%水合氯醛(4ml/kg)腹腔麻醉。小鼠背部皮肤脱毛后，以脊柱为纵线和垂直于脊柱纵线的二分之一处为横线将背部皮肤分为四个区。左侧为对照区，不做任何处理；右侧头部区为点阵CO2激光照射区(简称点阵区)，尾部区为Nd：YAG激光(准长脉宽1 064nm波长)照射区(简称长脉宽区)。照射区皮肤用1‰新洁尔灭常规消毒后自然干燥。点阵CO2激光照射的能量为50mJ/cm2，正方形光斑(4mm×4mm)，脉宽2ms，密度100/cm2，光斑之间不重叠照射一遍；Nd：YAG激光(准长脉宽1064nm波长)照射的能量为14.1mJ/cm2，圆形光斑(3.0mm)，脉宽0.3ms，光斑重叠1/3，照射两遍；两组照射面积均约2cm×2cm。24只小鼠激光照射4次，每次间隔10天，全部照射结束后，分别在第2周、1个月、3个月各处死8只小鼠，分别取每只小鼠四个部位的皮肤用于进一步实验。
1.3 组织学观察：每只小鼠的四块样本，以10%甲醛溶液固定，乙醇梯次浓度逐级脱水，石蜡包埋，切片。常规HE切片用于计算成纤维细胞计数及测量真皮厚度；饱和苦味酸-天狼猩红染色切片用偏振光显微镜照相以分析Ⅰ型、Ⅲ型胶原纤维含量；Gomori醛品红染色切片用于分析弹力纤维含量。以上所有切片标本均以每张切片随机选取三个视野，用Motic医学图像分析软件分析，最后取均值作为该切片的分值。
1.4 统计学分析：所有数据采用SPSS 13.0软件包进行统计分析。相关表格均由Microsoft Excel 2007绘制。计量资料采用x±s进行描述，资料进行正态性检验及方差齐性检验后， Wilcoxon秩检验或t检验用于两组间的比较，方差分析比较各时间段之间的差别，两两比较采用LSD法，规定检验水准α=0.05，P<0.05为差别具有统计学意义。
2 结果
肉眼观察可见点阵CO2激光照射自然老化昆明小白鼠后，照射区域皮肤表面即刻呈现均匀的黄褐色点状结痂，轻度水肿，次日水肿消失，点状结痂3～7日脱落。脱痂后皮肤表面光滑，无瘢痕及色素异常；Nd：YAG激光(准长脉宽1064nm波长)照射区域皮肤表面微红，无结痂，次日皮肤基本恢复正常。
2.1 点阵CO2激光及Nd：YAG激光(准长脉宽1 064nm波长)照射对成纤维细胞数量及真皮厚度的影响：点阵CO2激光和Nd：YAG激光(准长脉宽1064nm波长)照射自然老化昆明小白鼠后2周、1个月及3个月，HE染色标本显示两种激光照射区相对于对照区成纤维细胞计数及真皮厚度均显著增加，点阵CO2激光照射较Nd：YAG激光(准长脉宽1064nm波长)照射效果明显(见表1、表2、图2)。在照射后一个月，点阵CO2激光较Nd：YAG激光(准长脉宽1 064nm波长)成纤维细胞计数及真皮厚度差别显著(见图1)。
2.2 点阵CO2激光及Nd：YAG激光(准长脉宽1 064nm波长)照射对胶原增生的影响：点阵CO2激光及Nd：YAG激光(准长脉宽1064nm波长)照射自然老化昆明小白鼠后，经偏振光镜检饱和苦味酸-天狼猩红切片可见Ⅰ型胶原纤维呈红黄色，较粗大，而Ⅲ型胶原纤维呈绿色细丝状 ......
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