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编号:13308656
miR—let—7b通过调控相关细胞周期蛋白影响皮肤黑色素瘤的增殖和凋亡(2)
http://www.100md.com 2018年4月1日 《中国美容医学》 2018年第7期
     1.2 细胞株与主要试剂:人黑色素瘤M21,A375,B16,B78H1和Malme-3M细胞株均购买于复旦大学细胞库(在37℃,5% CO2条件下,含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中培养)。胎牛血清,RPMI 1640培养基均购自美国Gibco公司。Transwell小室购自美国Millipore公司,Matrigel购自美国BD公司。MALAT1,miR-20a及对照慢病毒购自上海吉凯制药技术有限公司。Lipofectamine 2000转染试剂购于日本TAKARA公司。逆转录试剂盒(FSQ-101)购自日本TOYOBO公司,PCR试剂盒购自美国Sigma公司。荧光素酶活性检测试剂盒购自Promega公司。荧光素酶报告载体由Promega公司合成。

    1.3 qPCR实验:使用miRNA提取试剂盒进行mRNA抽提,实验过程按照试剂盒使用说明进行,抽提之后,使用核酸浓度检测仪检测RNA浓度和纯度,最后将其浓度稀释至50μg/ml,使用特异性反转录引物进行cDNA合成 ......
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