两种大便隐血检测方法的比较
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【摘要】目的: 探讨两种大便潜血试验在临床应用中的差异从而选择最适的测定方法。方法: 对在本院住院及门诊的500例患者，于送检当日，同时分别用化学法和免疫法做大便潜血试验，结果分别进行统计分析。结果: 500例受检者中化学法大便潜血试验阳性率15.4%(77/500)；免疫法大便潜血阳性率11.0%(55/500)。二者差异显著(P<0.05)。结论：免疫法的灵敏性、特异性均高于化学法，两者联合运用可以降低假阳性/阴性.以提高检测的准确性。
【关键词】大便潜血；免疫法;邻甲联苯胺法
【中图分类号】R446.13 【文献标识码】A 【文章编号】1008-6455(2011)12-0185-02
大便潜血实验是诊断各种原因引起的消化道出血及筛选诊断胃肠道恶性肿瘤的重要手段。目前,临床上应用的大便潜血检测的各种方法不外乎两大类:化学方法和免疫方法。在临床应用中,我们发现每种方法都有其优势,同时也存在着测定方法上的局限性。
粪便潜血试验是诊断各种原因引起的消化道出血及筛查、协助诊断消化道恶性肿瘤的重要手段，检测方法较多，其中邻联甲苯胺法为1983年中华医学会全国临床检验方法学学术讨论会推荐的方法，但易出现假阳性。目前免疫法测定隐血已被临床广泛应用，为了解新方法与经典法在检测灵敏度特异性方面的特点，我们对这两种方法进行了比较研究。
1 材料与方法
1.1 材料:单克隆血红蛋白检测法用万华公司消康保大便潜血单克隆抗体法试剂盒; 化学法(邻甲联苯胺法)试剂盒：由珠海贝索生物技术有限公司提供。
1.2 方法:由专人随机采集本院当天门诊和住院患者粪便留于清洁、干燥、有盖的塑料小容器中，马上送到实验室。由指定专业人员严格按照试剂盒说明书操作要求，应用化学法和免疫法两种方法同时做大便潜血试验。
1.3 统计学处理:采用SPSS10.0软件包对实验数据采用卡方检验分析处理。
2 结果
在 5 0 0 例受检 者中，化 学 法和 免 疫法阳性率 分别为15.4%(77/500)和11.0%(55/500), 两者比较差异有统计学意义(x24.22,P<0.05)结果见表1。两种方法全阴性为408例；两种方法全阳性为40例。化学法阳性、免疫法阴性为37例；而免疫法阳性、化学法阴性为15例。具体和表2。表1 500例受检者大便潜血试验两种实验方法结果
表2 500例受检者大便潜血试验应用两种实验方法检测结果的分析
3 讨论
3.1 自1864年Vandeen发明了愈创木脂法检测大便潜血以来,人们不断探索,分别用过联苯胺法、匹拉米洞法、孔雀绿法、邻-联甲苯胺法等,它们都是基于血红蛋白中的亚铁血红素有过氧化物酶的活性,催化过氧化氢释放新生态的氧,使上述色原显色这一原理为基础这些方法受饮食影响很大,任何有类似氧化物酶活性的物质都可影响此实验，如动物的血红蛋白。另外维生素C、铁剂、绿色蔬菜均会造成假阴性。因此方法学上缺乏特异性。近年来,免疫学的发展对大便潜血检验方法改进产生了很大影响〖1〗。胶体金单克隆抗体免疫法利用金标Hb-抗体与Hb结合后,向上扩散分别与测试区的抗-Hb抗体及对照区的Hb结合,此时胶体金的颗粒聚集呈现颜色反应,它只针对人Hb抗原表位,基本排除了饮食及药物因素的干扰,被世界卫生组织(WHO)和世界胃肠镜检查协会推荐作为粪潜血实验的一种较为确认的方法〖2〗。但血红蛋白在消化道停留时间过长由于受到肠内细菌作用及大肠黏液成分影响而容易变性, 使其与包被抗体不能发生特异性结合而出现假阴性结果。在本试验中化学法阳性率(15.4%)远大于免疫法(11.0%),差异有统计学意义(x24.22,P<0.05)也说明了这一点。
3.2 在表2中化学法阳性免疫法阴性占437例，在这37例中有以下特点。多数病例出血部位在上消化道并部分大便呈棕褐色。有影响化学法假阳性因素存在(如饮食、用药等)。说明上消化道出血时HB在消化道停留时间过长，胃酸及其它因素造成HB的免疫原性(或HB分子构象)发生变化。与标记抗体不匹配无法进行特异性结合而出现假阴性。由于有影响化学法假阳性因素存在使得化学法测定大便潜血的假阳性率升高是造成两种实验方法检测结果不一致的主要原因。
3.3 对部分呈棕褐色的大便有可能大量出血而导致反应体系中抗原过剩出现前带现象,也叫钩状效应〖3〗。这部分粪便一般为柏油样黑便;稀释后检测11例出现阳性;是HB含量过大出现的抗原抗体比例不合适所致的假阴性。对这部分大便我们用盐水进行稀释以后再用免疫法进行测定，结果一部分可以出现阳性，而一部分仍然是阴性。在胃部，珠蛋白链被胃酸迅速地水解，在小肠被蛋白酶降解成血基质，免疫法虽然对Hb具有特异性，对血基质则没有，有可能出现假阴性，这说明在免疫法检测中假阴性的出现有两种可能，一种是抗原抗体比例不合适；另一种是HB的免疫原性发生改变〖4〗。这提示我们用胶体金试纸条评价上消化道出血时应慎重。
3.4 在本实验中(表2)有15例测定结果是化学法阴性免疫法阳性。对这15例病人进行分析发现多数病例的病种与消化道出血有关。只有两例是痔疮。我们在询问病史和了解病人病程变化情况以及用药中发现。多数病例确实有消化道出血的可能，这与实验结果相符。同时也有影响化学法测定大便潜血假阴性因素存在。故我们认为是化学法假阴性结果所致。
总之，粪便潜血实验中免疫法特异敏感，但有假阴性结果，化学法受干扰因素多，可对免疫法部分假阴性结果予以纠正。所以临床工作中免疫法检测阴性的标本建议用邻甲苯胺法复查，复查阳性的标本适当稀释后再用免疫法检测，也可以先用化学法试剂作为初检，检测为阳性的结果再加做免疫法予以复检确认，以提高检测的准确性。如果条件许可，在大肠癌普查时，同时应用化学法与免疫法两种方法，进一步提高胃肠道出血的检出率。笔者认为同时应用化学法与免疫法双联试纸或试剂可能会成为今后的常规方法 ......
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