乙酰肝素酶、血管内皮生长因子和核因子-kB在原发性膜性肾病患者肾小球内的表达变化及意义(2)
1.6 统计学方法
统计学分析均采用SPSS11.0计算机软件包处理，计量资料采用均数±标准差表示，样本均数间比较采用t检验，组间比较采用方差分析，各参数间的相关性分析采用pearson 相关分析。 p<0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 临床指标(表1)
2.2 免疫组化
2.2.1 Hpa表达情况 Hpa在对照组正常肾组织的肾小球基底膜、肾小球足细胞、系膜细胞及肾小管上皮细胞有少量表达。Hpa在IMN患者肾组织的肾小球基底膜及肾小管上皮细胞有表达。IMN I期组及II期组与对照组比较，肾小球内Hpa表达明显增强(p<0.01)；I期IMN组与II期IMN组比较，肾小球内Hpa表达差异无显著性(p>0.05)(表2)。
, 百拇医药
2.2.2 VEGF表达情况 VEGF在对照组正常肾组织的肾小球基底膜及肾小管上皮细胞有少量表达。IMN组肾小球内VEGF表达较对照组明显增强(p<0.01)。I期IMN组与II期IMN组比较，肾小球内VEGF表达差异有显著性(p<0.01)，II期IMN组较I期IMN组肾小球内VEGF表达减少。
2.2.3 NF-kB表达情况NF-kB在对照组正常肾组织的肾小球基底膜、肾小球足细胞、系膜细胞及肾小管上皮细胞有少量表达。NF-kB在IMN患者肾组织的肾小球基底膜及肾小管上皮细胞有表达。IMN I期组及II期组与对照组比较，肾小球内NF-kB表达明显增强(p<0.01)；I期IMN组与II期IMN组比较，肾小球内NF-kB表达差异无显著性(p>0.05)
2.3免疫组化指标与临床指标相关性分析
Hpa与24小时尿蛋白定量呈正相关关系，r=0.54,p<0.01,有统计学意义； VEGF与24小时尿蛋白定量呈正相关趋，r=0.30,p>0.05,无统计学意义，在I期IMN VEGF与24小时尿蛋白定量呈正相关关系，r=0.38,p<0.05,有统计学意义；NF-kB与24小时尿蛋白定量呈正相关关系，r=0.50,p<0.05,有统计学意义。三者与血肌酐均无相关性。
, 百拇医药
2.4 免疫组化指标相关性分析 Hpa与VEGF之间无明显相关性，但在I期IMN二者呈正相关关系，r=0.39,p<0.05，有统计学意义。Hpa与NF-kB之间正相关关系，r=0.40,p<0.05，有统计学意义。NF-kB与VEGF之间无明显相关性，但在I期IMN二者呈正相关关系，r=0.49，P<0.01，有统计学意义。
3 讨论
IMN的病因及发病机理并不十分清楚。可能涉及到基因多态、自身免疫、炎症反应、矫枉失衡等多方面的问题。IMN病变主要位于肾小球滤过膜，以肾小球脏层上皮细胞下嗜复红物质广泛沉积、GBM空泡变、僵硬、增厚、“钉突”形成、链环变等为特征。
肾小球滤过膜主要包括有孔的内皮细胞、肾小球基底膜(GBM)和上皮细胞。IV型胶原形成GBM的基本骨架，其间还填充着许多物质，包括层粘连蛋白、纤维连接蛋白、巢蛋白、HSPG等。以上成份的改变均可能影响肾小球的滤过功能而出现蛋白尿。
, 百拇医药
HSPG由一个核心蛋白、硫酸乙酰肝素(Heparin sulfate, Hs)及GAGs侧链组成。HSPG是ECM中非结构蛋白的重要组份，其通过与ECM及细胞的结合发挥生物学功能。HSPG的作用主要是为肾小球滤过膜的电荷屏障提供阴电荷，也可作为足细胞、内皮细胞和壁层上皮细胞的附着点。Hs为HSPG带阴离子的侧链。Hpa于D-葡萄糖醛酸和N-乙酰葡萄糖糖苷键裂解长链Hs，释放Hs相连的致炎因子，破坏HSPG，从而调节细胞表面和ECM与HSPG结合的各种活性因子的生物学作用，同时还可使HSPG上结合的负电荷减少，使GBM的电荷屏障受损。HSPG的减少可导致GBM的选择通透性改变以及肾小球上皮细胞和内皮细胞锚连位点的丧失，同时释放与HSPG结合的多种生长因子，包括成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)、血管内皮生长因子(VEGF)等。相关生长因子的释放可修复GBM，如不能修复则使GBM形成瘢痕[9]。Hpa可诱导炎症基因表达，并可激活内皮细胞产生直接的血管源性反应。Hpa的活性与免疫细胞穿透ECM屏障有关，Hpa抑制剂具有抗炎活性。本实验结果表明：Hpa在对照组正常肾小球内仅少量表达，而在IMN组肾小球内的表达I期与II期均明显高于对照组，且与24小时尿蛋白定量呈正相关关系。提示Hpa参与IMN蛋白尿的形成。此研究有别于Holt等的结果[12]与Vicki等的动物实验结果一致[3]。
, http://www.100md.com
Hpa降解或破坏HSPG时可以释放VEGF。VEGF可能具有正反两方面的作用。首先VEGF可能具有肾脏保护作用。因其有促进内皮细胞增殖、分化、存活、促进血管生长、建立侧枝循环和改善血流动力学等生物学作用。另有观点认为VEGF对肾脏也有有害的一面。VEGF能够减少GBM的阴离子数目，VEGF分泌的异常增加可以导致肾小球滤过膜对血浆蛋白通透性的增加，从而导致蛋白尿的形成。本实验结果显示VEGF在对照组正常肾小球有少量表达，而在IMN表达增加，但随分期分组的不同其表达量不同，II期IMN患者肾小球内VEGF的表达显著低于I期IMN患者，与24小时尿蛋白定量无明显相关性，I期IMN患者肾小球内VEGF表达与24小时尿蛋白定量呈正相关关系。有别于Honkanen等的结果，此现象可从不同角度理解：①VEGF并非IMN患者肾小球损害与尿蛋白增加的主要参与者。相反，VEGF可能以保护血管为主，有利于IMN向好的方向转归，即VEGF高表达者病理损害轻，低表达者病理损害重。②也可理解为VEGF表达减少可能与IMN进展、足细胞减少、分泌VEGF减少有关。
VEGF是与HSPG相连的生长因子，即HSPG是VEGF的储存池，Hpa水解HSPG的同时释放VEGF，且内源性Hpa调控VEGF的基因表达。故VEGF随着Hpa的增多而增多。另一方面VEGF又可减少Hpa的释放[12]。本实验结果显示：Hpa表达与VEGF表达无明显相关性，但在I期IMN二者之间呈正相关关系。以上结果表明：Hpa、及VEGF两因子之间具有一定的相关性。, 百拇医药(姚素花 王彦 陈凤慧)
统计学分析均采用SPSS11.0计算机软件包处理，计量资料采用均数±标准差表示，样本均数间比较采用t检验，组间比较采用方差分析，各参数间的相关性分析采用pearson 相关分析。 p<0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 临床指标(表1)
2.2 免疫组化
2.2.1 Hpa表达情况 Hpa在对照组正常肾组织的肾小球基底膜、肾小球足细胞、系膜细胞及肾小管上皮细胞有少量表达。Hpa在IMN患者肾组织的肾小球基底膜及肾小管上皮细胞有表达。IMN I期组及II期组与对照组比较，肾小球内Hpa表达明显增强(p<0.01)；I期IMN组与II期IMN组比较，肾小球内Hpa表达差异无显著性(p>0.05)(表2)。
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2.2.2 VEGF表达情况 VEGF在对照组正常肾组织的肾小球基底膜及肾小管上皮细胞有少量表达。IMN组肾小球内VEGF表达较对照组明显增强(p<0.01)。I期IMN组与II期IMN组比较，肾小球内VEGF表达差异有显著性(p<0.01)，II期IMN组较I期IMN组肾小球内VEGF表达减少。
2.2.3 NF-kB表达情况NF-kB在对照组正常肾组织的肾小球基底膜、肾小球足细胞、系膜细胞及肾小管上皮细胞有少量表达。NF-kB在IMN患者肾组织的肾小球基底膜及肾小管上皮细胞有表达。IMN I期组及II期组与对照组比较，肾小球内NF-kB表达明显增强(p<0.01)；I期IMN组与II期IMN组比较，肾小球内NF-kB表达差异无显著性(p>0.05)
2.3免疫组化指标与临床指标相关性分析
Hpa与24小时尿蛋白定量呈正相关关系，r=0.54,p<0.01,有统计学意义； VEGF与24小时尿蛋白定量呈正相关趋，r=0.30,p>0.05,无统计学意义，在I期IMN VEGF与24小时尿蛋白定量呈正相关关系，r=0.38,p<0.05,有统计学意义；NF-kB与24小时尿蛋白定量呈正相关关系，r=0.50,p<0.05,有统计学意义。三者与血肌酐均无相关性。
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2.4 免疫组化指标相关性分析 Hpa与VEGF之间无明显相关性，但在I期IMN二者呈正相关关系，r=0.39,p<0.05，有统计学意义。Hpa与NF-kB之间正相关关系，r=0.40,p<0.05，有统计学意义。NF-kB与VEGF之间无明显相关性，但在I期IMN二者呈正相关关系，r=0.49，P<0.01，有统计学意义。
3 讨论
IMN的病因及发病机理并不十分清楚。可能涉及到基因多态、自身免疫、炎症反应、矫枉失衡等多方面的问题。IMN病变主要位于肾小球滤过膜，以肾小球脏层上皮细胞下嗜复红物质广泛沉积、GBM空泡变、僵硬、增厚、“钉突”形成、链环变等为特征。
肾小球滤过膜主要包括有孔的内皮细胞、肾小球基底膜(GBM)和上皮细胞。IV型胶原形成GBM的基本骨架，其间还填充着许多物质，包括层粘连蛋白、纤维连接蛋白、巢蛋白、HSPG等。以上成份的改变均可能影响肾小球的滤过功能而出现蛋白尿。
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HSPG由一个核心蛋白、硫酸乙酰肝素(Heparin sulfate, Hs)及GAGs侧链组成。HSPG是ECM中非结构蛋白的重要组份，其通过与ECM及细胞的结合发挥生物学功能。HSPG的作用主要是为肾小球滤过膜的电荷屏障提供阴电荷，也可作为足细胞、内皮细胞和壁层上皮细胞的附着点。Hs为HSPG带阴离子的侧链。Hpa于D-葡萄糖醛酸和N-乙酰葡萄糖糖苷键裂解长链Hs，释放Hs相连的致炎因子，破坏HSPG，从而调节细胞表面和ECM与HSPG结合的各种活性因子的生物学作用，同时还可使HSPG上结合的负电荷减少，使GBM的电荷屏障受损。HSPG的减少可导致GBM的选择通透性改变以及肾小球上皮细胞和内皮细胞锚连位点的丧失，同时释放与HSPG结合的多种生长因子，包括成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)、血管内皮生长因子(VEGF)等。相关生长因子的释放可修复GBM，如不能修复则使GBM形成瘢痕[9]。Hpa可诱导炎症基因表达，并可激活内皮细胞产生直接的血管源性反应。Hpa的活性与免疫细胞穿透ECM屏障有关，Hpa抑制剂具有抗炎活性。本实验结果表明：Hpa在对照组正常肾小球内仅少量表达，而在IMN组肾小球内的表达I期与II期均明显高于对照组，且与24小时尿蛋白定量呈正相关关系。提示Hpa参与IMN蛋白尿的形成。此研究有别于Holt等的结果[12]与Vicki等的动物实验结果一致[3]。
, http://www.100md.com
Hpa降解或破坏HSPG时可以释放VEGF。VEGF可能具有正反两方面的作用。首先VEGF可能具有肾脏保护作用。因其有促进内皮细胞增殖、分化、存活、促进血管生长、建立侧枝循环和改善血流动力学等生物学作用。另有观点认为VEGF对肾脏也有有害的一面。VEGF能够减少GBM的阴离子数目，VEGF分泌的异常增加可以导致肾小球滤过膜对血浆蛋白通透性的增加，从而导致蛋白尿的形成。本实验结果显示VEGF在对照组正常肾小球有少量表达，而在IMN表达增加，但随分期分组的不同其表达量不同，II期IMN患者肾小球内VEGF的表达显著低于I期IMN患者，与24小时尿蛋白定量无明显相关性，I期IMN患者肾小球内VEGF表达与24小时尿蛋白定量呈正相关关系。有别于Honkanen等的结果，此现象可从不同角度理解：①VEGF并非IMN患者肾小球损害与尿蛋白增加的主要参与者。相反，VEGF可能以保护血管为主，有利于IMN向好的方向转归，即VEGF高表达者病理损害轻，低表达者病理损害重。②也可理解为VEGF表达减少可能与IMN进展、足细胞减少、分泌VEGF减少有关。
VEGF是与HSPG相连的生长因子，即HSPG是VEGF的储存池，Hpa水解HSPG的同时释放VEGF，且内源性Hpa调控VEGF的基因表达。故VEGF随着Hpa的增多而增多。另一方面VEGF又可减少Hpa的释放[12]。本实验结果显示：Hpa表达与VEGF表达无明显相关性，但在I期IMN二者之间呈正相关关系。以上结果表明：Hpa、及VEGF两因子之间具有一定的相关性。, 百拇医药(姚素花 王彦 陈凤慧)