糖尿病肾病肾阴虚证ＤＮＡ消减文库的构建
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摘
要：在多年糖尿病肾病(diaberic nephropathy，DN)肾虚证的研究中，结果发现血管紧张素I转换酶(angiotensinI—convertingenzyme，ACE)基因多态性与肾阴虚证密切相关。这提示肾阴虚证存在其相关基因。 目前克隆疾病的相关基因有多种方法，其中抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization，SSH)对研究复杂基因组的差异基因具有一定的优越性。 目的：采用抑制性消减杂交技术(suppressi。nsub—tractive hybridization，SSH)构建汉族人糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)肾阴虚证DNA消减文库。方法：选择汉族DN且中医辨证为肾阴虚证的患者以及正常人作为其对照组，进行正向和反向消减杂交。用硅胶法抽提血白细胞DNA，用RsaI酶切基因组DNA成大小不等的片段，分别与两种不同的接头连接，进行两次消减杂交及两次抑制性PCR，将PCR产物与U载体连接，经蓝白斑筛选后，再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒，构建DN肾阴虚证DNA消减文库。结果：用SSH方法筛选出了DN肾阴虚证的差异DNA片段，得到586个白色克隆，再经PCR方法，决速筛选出阳性重组质粒，从而成功地构建了DN肾阴虚证的DNA消减文库。结论：SSH技术能够快速有效地分离差异DNA片段以构建DN肾阴虚证DNA消减文库，为进一步筛选和克隆DN肾阴虚证相关基因奠定了基础。
关 键 词：糖尿病肾病；
肾阴虚证；
抑制性消减杂交；
基因组消减文库
中图分类号：R587
文献标识码：A
文章编号：1009—5276(2004)07—1204—03
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