糖尿病肾病微循环障碍发生机制及中药复方干预作用(1)
摘要：目的：观察中药复方对早期糖尿病肾病大鼠肾脏血流动力学影响及其机制。方法：采用高糖高脂饲料喂养及腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立了早期糖尿病肾病(DN)大鼠模型。检测血糖，尿微量白蛋白(UAIB)，肾小球滤过率(GFR)，血栓素(TXB)，6-酮前列腺素(6-keto-PGF)水平，并用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测肾皮质中血小板衍化生长因子-B(PDGF-B)基因水平。结果：DN大鼠血糖，UAIb及TXB明显升高，6-keto-PGF下降及肾皮质PDGF-B基因表达明显上调。用中药复方治疗后血糖，UAIb及TXB下降，6-keto-PGF增高，下调PDGF-B基因的过度表达，并发现PDGF—B基因水平与UAIb、TXB2均呈正相关(γ=0.5204，0.5011，P
2.5RT-PCR法肾皮质PDGF-B基因检测步骤①肾皮质总RNA提取(采用Trizol试剂)：②逆转录(按大连宝生物工程有限公司cDNA合成试剂盒进行操作)：将反应管放入扩增仪(PCR)内，按55℃1min，30℃5min，15～30min内匀速升温至55℃，55℃15～30min，98℃5min和5℃5min的条件进行逆转录反应。③PCR扩增：反应液混匀后按以下条件进行扩增：94℃5min预变性，变性与退火温度及时间见表2，72℃引物延伸1min，循环后72℃延伸5min。
④电泳(PCR产物分析)：以DNAmaker为标准，结果用自动电泳凝胶分析系统对每一样品PCR产物扩增的特异性片段进行光密度扫描，并以β-acfin密度作为参考定量标准。根据特异扩增片段(IOD)/B-acfin(IOD)的比值，对目的基因片段的mRNA表达水平进行半定量分析。
2.6统计方法 采用SPSS Ver10.00统计软件进行两组间比较t检验，以P0.05)。中药各组治疗后比治疗前血糖和尿微量白蛋白均有降低，(P
3.4血栓素(TXB2)6-酮前列腺素(6-keto-PGF), http://www.100md.com(关 欣 郑红光)
2.5RT-PCR法肾皮质PDGF-B基因检测步骤①肾皮质总RNA提取(采用Trizol试剂)：②逆转录(按大连宝生物工程有限公司cDNA合成试剂盒进行操作)：将反应管放入扩增仪(PCR)内，按55℃1min，30℃5min，15～30min内匀速升温至55℃，55℃15～30min，98℃5min和5℃5min的条件进行逆转录反应。③PCR扩增：反应液混匀后按以下条件进行扩增：94℃5min预变性，变性与退火温度及时间见表2，72℃引物延伸1min，循环后72℃延伸5min。
④电泳(PCR产物分析)：以DNAmaker为标准，结果用自动电泳凝胶分析系统对每一样品PCR产物扩增的特异性片段进行光密度扫描，并以β-acfin密度作为参考定量标准。根据特异扩增片段(IOD)/B-acfin(IOD)的比值，对目的基因片段的mRNA表达水平进行半定量分析。
2.6统计方法 采用SPSS Ver10.00统计软件进行两组间比较t检验，以P0.05)。中药各组治疗后比治疗前血糖和尿微量白蛋白均有降低，(P
3.4血栓素(TXB2)6-酮前列腺素(6-keto-PGF), http://www.100md.com(关 欣 郑红光)