肝纤维化不同证型与TGF-β1/Smad基因蛋白表达关系的实验研究(2)
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1.3 器材
隔水式电热恒温培养箱(PYX-DHS-35×40,上海),组织切片机(Leitz 1512型,上海),彩色病理分析系统(HPIAS-1000型,武汉),荧光显微镜摄像机(OLYMPUS BX60型,日本),TGL-16G型高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂生产),DDL-5低速离心机(上海安亭科学仪器厂生产),PCR扩增仪(美国TECHNE公司),电泳仪(美国BIO-RAD公司),紫外分光光度计(美国BIO-RAD公司),紫外透射反射分析仪(上海嘉鹏科技有限公司),GIS凝胶图像处理系统(上海TANON科技有限公司实验)。
1.4 模型制备
1.4.1 单纯肝纤维化模型的建立[5] 将CCl4与橄榄油按4∶6比例配成40%油剂。按0.3mL/100g剂量皮下注射,2次/周。6周后据随机抽取大鼠10只处死,取肝组织行病理观察,按实验动物肝纤维化组织学Ⅵ级标准进行肝纤维化程度评判[6],示模型制备成功。治疗期间继续使用CCl4维持至实验结束。
1.4.2 中医病证结合模型的建立 在单纯肝纤维化造模的基础上,肝纤维化肝郁脾虚证组第4周始加用慢性夹尾激怒加高浓度大黄灌胃法造模,共2周,至出现肝郁脾虚的证候群[7];肝纤维化气虚血瘀组除用CCl4造模不变外,第4周始加用游泳疲劳试验,共2周[8-9] ......
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