中药细辛与藜芦配伍化学成分变化的UPLC/Q-TOF-MS研究(1)
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参见附件。
(1.清华大学化学系,北京 100084;2.辽宁中医药大学药学院,辽宁 大连 116600;
3.天津市现代中药检验中心,天津 300384;4.南开大学,天津 300410)
摘 要:目的:通过检测细辛、藜芦配伍使用前后所含化学成分的变化,研究传统中药理论“十八反”的科学内涵。方法:利用UPLC/Q-TOF MS BPI离子流图谱,分别绘制细辛单煎液、藜芦单煎液和细辛与藜芦配伍混煎液的BPI离子流指纹图谱,对图谱中分子离子峰进行分析,通过loadings确定差异分子离子,比较相同分子离子峰单煎、配伍混煎前后量的变化。结果:分别确定配伍混煎后细辛中有八个分子离子、藜芦中有十个分子离子峰峰面积变化超过9%以上。结论:从药理作用的物质基础研究,细辛“反”藜芦是具有一定道理的。
关键词:细辛;藜芦;十八反;UPLC/Q-TOF
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1673-7717(2010)04-0754-06
[FQ(9。25,X-W]
收稿日期:2008-12-17
基金项目:国家科技支撑计划(2006BAI08B04)
作者简介:孟宪生(1964-),男,浙江上于人,副教授,博士,研究方向:中药现代化与中药质量分析。
通讯作者:罗国安(1946-),男,教授,博士研究生导师,研究方向:中药现代化与生命分析化学研究。
康廷国(1955-),男,山东寿光人,教授,博士研究生导师,博士,研究方向:中药品质评价。
细辛是一味临床常用中药,入药的历史悠久,首载于《神农本草经》列“上品”,其味辛性温,有祛风散寒,止痛通窍,止咳平喘,通利血脉功效。中医用于治疗风寒头痛,痰饮咳喘,关节疼痛,鼻塞,牙痛等[1];藜芦味苦、辛性寒,有毒,入药的历史可上溯到《神农本草经》列“下品”,通常认为藜芦有涌吐风痰、杀虫疗疮的功效,治疗中风痰壅、喉痹不通、癫痫等[2]。
细辛反藜芦是中药“十八反”的内容之一,其说始见于《神农本草经序例》(原书早佚)。五代时韩宝升《蜀本草》指出:“相反者十八种”,当为十八反说的蓝本。迨至金代,张元素《珍珠囊补遗药性赋》将十八反以及十九畏编成歌诀广为流传,相沿至今。是历代医家用药配伍的禁忌。现代研究亦有论述,但结论不同[3],本文以发挥药理作用的化学物质基础为研究对象,探讨细辛、藜芦二味药单煎、混煎后所含化学物质的变化规律。
1实验部分
1.1 仪器与试剂
美国Waters AcquityTM UPLC/Q-TOF Premier;MassLynx V4.1工作站;德国Heidolph公司Laborata4000efficient旋转薄膜蒸发仪。
乙睛为色谱纯,美国Fisher公司;甲酸为色谱纯,天津市科密欧化学试剂开发中心;超纯水,实验室Milli-Q纯水机自制;其他试剂为分析纯。
细辛、藜芦药材均购自河北安国药材公司。经辽宁中医药大学翟延君教授鉴定为马兜铃科植物北细辛Asarum heterotropoidesFr.Schmidt var.mandshuricum(Maxim.)Kitag.和百合科植物藜芦Veratrum nigrum L.
1.2 仪器条件
1.2.1 色谱条件
色谱柱:Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18 Column(100mm×2.1mm i.d.,1.7μm);流速:0.4mL/min;柱温:40℃;流动相:A:0.1%甲酸水溶液,B:乙睛;梯度洗脱程序见表1。
表1 梯度洗脱程序
时间(min)A/%B/%Curve
Initial9010Initial
850506
965906
1020906
1.2.2 质谱条件
电喷雾离子源(ESI),采用正离子V模式检测;脱溶剂气流量为600L/h,脱溶剂气温为350℃,锥孔气流量为50L/h,离子源温度为120℃,毛细管电压为3kV,锥孔电压为30V。0.1s(间隔0.02s)采集一次谱图;采用Leucine enkephalin ([M+H]+=556.2771)作Lockmass。
1.3样品制备
1.3.1 内标液的配制 取盐酸小檗碱对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1mL含19.6μg的溶液,即得。
1.3.2 细辛单煎水溶液制备 取细辛药材粗粉3.0g,精密称定,置圆底烧瓶中,精密加入盐酸小檗碱对照品溶液3mL,加水100mL,加热回流提取2h,滤过,减压滤液浓缩至25mL,加乙醇定容至50mL量瓶中,摇匀,滤过,备用。
1.3.3 藜芦单煎水溶液制备 取藜芦药材粗粉5.0g,精密称定,置圆底烧瓶中,精密加入盐酸小檗碱对照品溶液3mL,加水100mL,加热回流提取2h,滤过,减压滤液浓缩至25mL,加乙醇定容至50mL量瓶中,摇匀,滤过,备用。
1.3.4 细辛 藜芦混煎水溶液制备 取细辛药材粗粉3.0g,取藜芦药材粗粉5.0g,精密称定置圆底烧瓶中,精密加入盐酸小檗碱对照品溶液3mL,加水200mL,加热回流提取2h,滤过,减压滤液浓缩至25mL,加乙醇定容至50mL量瓶中,摇匀,滤过,备用。
2结 果
2.1细辛与藜芦配伍过程中细辛 藜芦中化学成分变化的研究
按1.2分析条件,绘制细辛单独煎煮液、藜芦单独煎煮液和细辛与藜芦配伍共同煎煮液的UPLC/Q-TOF MS BPI离子流图、质谱图,见图1～3所示。
2.2 数据处理
数据采用Micromass Markerlynx软件进行处理。采用偏最小二乘法对质谱中的质荷比进行分析。给出导致其区别(或相似性)的有贡献变量及其贡献程度。分析结果见图4 ......
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