三七茜草复方干预置Cu-IUD家兔出血副反应的拆方实验研究(2)
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参见附件。
1.2.2造模方法参照采用文献[2]的造模方法,根据家兔双角子宫的生理结构,将IUD剪去T形的上半部分,取其下端带一小孔的棒状部分(含5节铜环,全长约2cm)备用。除空白对照组8只及假手术组8只外,其余40只家兔在2%戊巴比妥钠(50mg/kg)静脉麻醉下行无菌剖腹术。先固定四肢,去毛剖腹,暴露子宫角,在右侧子宫距阴道3.5cm处作一直径2mm的切口,朝阴道方向插入改造后的IUD并将其固定于子宫壁上,缝合切口,假手术组家兔用同样的方法麻醉,剖腹,在右侧子宫作切口但不放置IUD,术后每只动物分别肌注青霉素80万U抗感染,所有动物均在同样环境下采用同样饲料分笼饲养30天。
1.2.3给药方法造模后第31天开始分别给药:模型组、假手术组、空白对照组给予8mL/(kg•d)蒸馏水灌胃;三七组、茜草组、SQ复方组、吲哚美辛对照组分别按4.082g/(kg•d)、1.54g/(kg•d)、2.208g/(kg•d)、0.0035g/(kg•d)灌胃,灌胃体积为8mL/(kg•d)。各组均连续用药7天。
1.2.4标本采集及检测
(1)各组动物于末次灌胃后2 h,用25%乌来糖按4 mL/kg耳缘静脉麻醉。采用心脏穿刺取血,肝素抗凝和枸橼酸钠抗凝,进行血液流变学各项指标的检测。①取肝素抗凝血1mL,加入锥盘仪中,测全血比低、中、高切变率;②取肝素抗凝血离心后的血浆1mL,加入LBY-N6型血液流变仪中,自动测出血浆比黏度;③取肝素抗凝全血1mL,加入红细胞比容管中,3000 r/min离心30 min,然后观察红细胞比容的结果;④采用魏氏法取枸橼酸钠抗凝血1mL,放入垂直血沉管中,在室温18～25℃条件下,1h后观察血沉结果。(2)抽血结束后用空气栓塞法处死动物,迅速剖腹取Cu-IUD接触处子宫组织,未置器家兔取右侧相应部位子宫,10%甲醛固定后,HE染色,石腊包埋切片,光镜观察子宫内膜表浅微血管的变化,分别计数5个100倍视野下子宫内膜表浅微血管总数。(3)取IUD接触处子宫组织200mg,未置器动物取右侧相应部位子宫组织200mg,用眼科剪剪成小碎块,再加入4.5mL生理盐水和0.5mL无水乙醇(1∶9),倒入玻璃匀浆器,按1500r/min研磨8min,使组织匀浆化,制成4%的组织匀浆,将匀浆以3500r/min离心15min,取上清液-70℃保存。采用放射免疫试剂盒测定6-K-PGF1α和TXB2。(4)取IUD接触处子宫组织0.5g,未置器动物取右侧相应部位子宫组织0.5g,用眼科剪剪成小碎块,加入5mL生理盐水,倒入玻璃匀浆器,按1500r/min研磨8min,使组织匀浆化,制成10%的组织匀浆,将匀浆以3500r/min离心15min,取上清液-70℃保存。采用ELISA测定t-PA。
2 实验结果
2.1 血液流变学结果
模型组与空白对照组比较红细胞比容值、全血比黏度(低切、中切、高切)及血浆比黏度的检测的数值明显增高(P<0.01),说明模型组血液流变性发生改变。各药物治疗组都有降低红细胞比容、全血比黏度(低切、中切、高切)和血浆比黏度的作用(P<0.05,P<0.01)见表1,说明三七、茜草、SQ复方、吲哚美辛都有降低红细胞比容和低切、中切、高切下全血比黏度及血浆比黏度的作用,从而调节血液流变性。
表1SQ复方拆方对置Cu-IUD家兔血液流变学的影响(n=8,±s)
注:与空白对照组比较,△P<0.05,△△P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01;与吲哚美辛组比较,#P<0.05;与SQ复方组比较,☆P<0.05,☆☆P<0.01。
2.2子宫内膜表浅微血管总数测定结果
模型组家兔子宫内膜浅血管数明显增多,与未置器组(空白对照组、假手术组)比较具有显著性差异(P<0.01),说明造模后子宫内膜明显充血;各药物治疗组都有明显减少置器后家兔子宫内膜浅血管数,与模型组比较具有显著性差异(P<0.01);三七、茜草、SQ复方与吲哚美辛组比较无显著性差异(P>0.05)。以上结果表明三七、茜草、SQ复方均具有减少置Cu-IUD家兔子宫内膜的无菌性炎症作用,其作用与吲哚美辛相似,且三组疗效无差异。见表2。
表2SQ复方拆方对置Cu-IUD家兔子宫内膜浅表微血管数的影响(±s)
注:与空白对照组比较,△P<0.05,△△P<0.01;与模型组比较,*P<0.01;与吲哚美辛组比较,#P<0.05,##P<0.01;与SQ复方组比较,☆P<0.05,☆☆P<0.01。
2.36-K-PGF1α和TXB2测定结果
模型组家兔子宫匀浆6-k-PGF1α水平明显增高,TXB2水平明显降低,6-K-PGF1α/TXB2比值明显升高,空白对照组、假手术组与模型组相比较具有统计学意义(P<0.01),说明造模后上述指标发生了变化。各治疗组与模型组比较,家兔子宫匀浆6-K-PGF1α含量明显降低,TXB2含量明显增高,6-K-P/TXB2比值明显降低(P<0.01),说明三七、茜草、SQ复方、吲哚美辛都具有治疗作用;其中SQ复方组、吲哚美辛组与空白对照组比较,TXB2含量及6-K-P/TXB2比值均无显著性差异(P>0.05)。三七组、茜草组与SQ复方组比较6-K-PGF1α含量、TXB2含量、6-K-P/TXB2比值降低均有显著性差异见表3,说明单用三七或茜草治疗,效果不如SQ复方。
表3SQ复方拆方对置Cu-IUD家兔子宫匀浆前列腺素的影响(n=8,±s)
*注:与空白对照组比较,△P<0.05,△△P<0.01;与模型组比较,*P<0.01;与吲哚美辛组比较,#P<0.05,##P<0.01;与SQ复方组比较,☆P<0.05,☆☆P<0.01。
表4SQ复方拆方对置Cu-IUD
注:与空白对照组比较,△P<0.05,△△P<0.01;与模型组比较,*P<0.01;与吲哚美辛组比较,#P<0.05,##P<0.01;与SQ复方组比较,☆P<0.05,☆☆P<0.01。
2.4t-PA活性测定结果
模型组家兔子宫匀浆t-PA活性较空白对照组、假手术组明显增高(P<0.01)。各组治疗后家兔子宫匀浆t-PA活性明显降低(P<0.01);说明三七、茜草、SQ复方、吲哚美辛都具有治疗作用。三七组、茜草组与SQ复方组比较t-PA活性有显著性差异(P<0.05)见表4,说明单用三七或茜草治疗,效果不如SQ复方。
3讨 论
宫环出血发生的机理目前尚不十分明了,主要从子宫内膜的形态学及上皮细胞内酶活性的改变、浅表微血管及螺旋动脉的改变、前列腺素和溶酶体的变化,纤溶及凝血和抗凝血系统功能变化、内皮素的改变、子宫内膜局部受体的变化等方面进行探讨。多数研究认为置IUD后子宫内膜形态学改变,及子宫内膜组织型纤溶酶原激活物(t-PA)含量增加,前列腺素(PGs)系统平衡改变是导致置IUD后子宫异常出血的主要机制[1-3] ......
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