卵蛋白致敏新西兰家兔建立支气管哮喘模型(2)
参见附件(12kb)。
2 方 法
2.1 模型制备 家兔适应性饲养7天无异常后，模型组家兔予10%卵蛋白(生理盐水溶液)腹腔注射，空白对照组家兔予等剂量生理盐水腹腔注射。各组每只家兔均注射一次。
按照豚鼠的注射剂量为200mg/kg，体重为250g，家兔体重为1kg计，根据换算公式DBDA*RB/RA*(WA/WB)1/3(其中DA200mg/kg；DB为家兔每千克体重给予的卵蛋白量；RA为豚鼠的体型系数；RB为家兔体型系数；WA为豚鼠体重；WB为家兔体重)得出家兔每千克体重给予卵蛋白量为120mg。模型组注射卵蛋白溶液量为1.2mL/kg，空白对照组注射生理盐水1.2mL/kg。
14天后，将家兔置于一密闭容器内，此容器与402A型超声雾化器相连通，用1%OVA生理盐水溶液雾化激发。连续雾化7日，每日1次，每次首先雾化8～10min后停止雾化，打开容器盖间隔1～2min，目的使家兔避免窒息，然后再雾化8～10min后间隔1～2min，这样反复操作直至家兔出现腹肌抽搐、烦躁、唇鼻紫绀、二便失禁等表现。
2.2 标本采取 ①耳缘静脉血：第7日雾化结束后当天，首先采取两组家兔耳静脉血。将家兔固定于兔盒内，拔去耳缘少许毛发后，用酒精棉棒擦拭消毒并轻缕耳缘使静脉充盈，用2mL注射器逆血流方向采取1mL静脉血，立即注入事先加有EDTA的抗凝管内，室温放置30min后，离心(400r/min,5min)，晾干后用瑞氏——姬姆萨染色液染色30min，冲洗后晾干。用低倍镜(10×)寻找分布均匀的视野，用油镜(100×)作白细胞分类计数，每个样本计数100个细胞，选取其中嗜酸性粒细胞计数作为统计分析数据。图片抓取采用北京普利生医学仪器公司图像自动分析系统。
②支气管肺泡灌洗液：耳静脉取血后，将事先配置的浓度为10%的水合氯醛麻醉剂，按每只家兔1mL/kg体重耳静脉注射麻醉。家兔成功麻醉后，固定于解剖台，剪开颈部皮层，暴露主支气管，用镊子将其剥离，在主支气管上剪一小口，插入气管插管，再将一导管经气管插管轻插入到肺中气管壁样结构的位置，注入3mL普通生理盐水，然后回抽，反复回抽2～3次，将回抽液注入冰中冷却的离心管。细胞悬液用细胞离心机涂片，约每100mL/片。离心(400r/min,5min)，晾干后用瑞氏——姬姆萨染色液染色30min，冲洗后晾干。用低倍镜(10×)寻找分布均匀的视野，用油镜(100×)作白细胞分类计数 ......
2 方 法
2.1 模型制备 家兔适应性饲养7天无异常后，模型组家兔予10%卵蛋白(生理盐水溶液)腹腔注射，空白对照组家兔予等剂量生理盐水腹腔注射。各组每只家兔均注射一次。
按照豚鼠的注射剂量为200mg/kg，体重为250g，家兔体重为1kg计，根据换算公式DBDA*RB/RA*(WA/WB)1/3(其中DA200mg/kg；DB为家兔每千克体重给予的卵蛋白量；RA为豚鼠的体型系数；RB为家兔体型系数；WA为豚鼠体重；WB为家兔体重)得出家兔每千克体重给予卵蛋白量为120mg。模型组注射卵蛋白溶液量为1.2mL/kg，空白对照组注射生理盐水1.2mL/kg。
14天后，将家兔置于一密闭容器内，此容器与402A型超声雾化器相连通，用1%OVA生理盐水溶液雾化激发。连续雾化7日，每日1次，每次首先雾化8～10min后停止雾化，打开容器盖间隔1～2min，目的使家兔避免窒息，然后再雾化8～10min后间隔1～2min，这样反复操作直至家兔出现腹肌抽搐、烦躁、唇鼻紫绀、二便失禁等表现。
2.2 标本采取 ①耳缘静脉血：第7日雾化结束后当天，首先采取两组家兔耳静脉血。将家兔固定于兔盒内，拔去耳缘少许毛发后，用酒精棉棒擦拭消毒并轻缕耳缘使静脉充盈，用2mL注射器逆血流方向采取1mL静脉血，立即注入事先加有EDTA的抗凝管内，室温放置30min后，离心(400r/min,5min)，晾干后用瑞氏——姬姆萨染色液染色30min，冲洗后晾干。用低倍镜(10×)寻找分布均匀的视野，用油镜(100×)作白细胞分类计数，每个样本计数100个细胞，选取其中嗜酸性粒细胞计数作为统计分析数据。图片抓取采用北京普利生医学仪器公司图像自动分析系统。
②支气管肺泡灌洗液：耳静脉取血后，将事先配置的浓度为10%的水合氯醛麻醉剂，按每只家兔1mL/kg体重耳静脉注射麻醉。家兔成功麻醉后，固定于解剖台，剪开颈部皮层，暴露主支气管，用镊子将其剥离，在主支气管上剪一小口，插入气管插管，再将一导管经气管插管轻插入到肺中气管壁样结构的位置，注入3mL普通生理盐水，然后回抽，反复回抽2～3次，将回抽液注入冰中冷却的离心管。细胞悬液用细胞离心机涂片，约每100mL/片。离心(400r/min,5min)，晾干后用瑞氏——姬姆萨染色液染色30min，冲洗后晾干。用低倍镜(10×)寻找分布均匀的视野，用油镜(100×)作白细胞分类计数 ......
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