不同产地和生态环境穿龙薯蓣两种活性成分的含量测定(2)
参见附件(12kb)。
1 材料与仪器
Agilent1100高效液相色谱仪，VWD紫外检测器，KQ3200超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，CP225D电子天平(德国Sartorius公司)。乙腈为色谱纯，乙醇(95%)为分析纯，水为重蒸水。薯蓣皂苷(自制，纯度≥98%)和原薯蓣皂苷(天津马克生物技术有限公司，纯度≥98%)。所用穿龙薯蓣药材收集于2009年7月-9月，见表1，经辽宁中医药大学药用植物教研室尹海波副教授鉴定，凭证标本保存于本院药用植物教研室。
表1 穿龙薯蓣药材样品来源信息
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Agilent TC-C18(5μm,4.6 mm×250 mm)；检测波长：203 nm；柱温：35℃；体积流量：1.0 mL·min-1；流动相：A-乙腈，B-水梯度洗脱：0～6 min，23%～25%A；6～10 min，25%～27%A；10～20 min，27%～46%A；20～25 min，46%～46%A；25～30 min，46%～56%A；30～37 min，56%A；进样量：20 μL。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取原薯蓣皂苷对照品27.75 mg，置25 mL容量瓶中，用10 mL蒸馏水溶解，再加入15 mL乙腈，稀释至刻度，摇匀制成每1 mL含1.11 mg的对照品溶液备用；精密称取薯蓣皂苷对照品35.00 mg，置50 mL容量瓶中，用甲醇溶解稀释至刻度，摇匀制成每1 mL含0.70 mg的对照品溶液备用。精密吸取两对照品溶液各5 mL，置容量瓶中摇匀备用。
2.3 供试品溶液的制备
精密称定穿龙薯蓣药材粉末0.5g，置100mL具塞锥形瓶中，加入30倍量75%乙醇，密塞，称重，超声处理30min，过滤后再加75%乙醇30倍量，超声处理30min后过滤，合并过滤液，浓缩定容于25mL容量瓶中，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液备用。
2.4 方法学考察
2.4.1 标准曲线绘制 精密量取原薯蓣皂苷和薯蓣皂苷对照品溶液4.0、6.0、8.0、10.0、12.0μL注入高效液相色谱仪中，以对照品进样量质量为横坐标，峰面积为纵坐标，得原薯蓣皂苷回归方程为：y338.75x-607.45，r0.999 8，线性范围为4.44～13.32μg；得薯蓣皂苷回归方程为：y637.23x-1146，r0.999 8，线性范围为2.8～8.4μg，结果表明线性关系良好。
2.4.2 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液10μL，重复进样6次，按照2.1项下色谱条件测定峰面积，原薯蓣皂苷和薯蓣皂苷的峰面积RSD分别为0.8%和0.7%(n6)。
2.4.3 重复性试验 精密称取混合均匀的(2号样品)药材粉末6份，按2.3项下制备供试品溶液，分别进样20 μL，按照2.1项下色谱条件测定峰面积并计算原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷的质量分数，RSD分别为2.4%和1.9%(n6)。
2.4.4 稳定性试验 精密吸取同一(2号样品)供试品试液，在室温下放置，分别于0、2、4、6、8、10、12、24 h测定原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷的峰面积， RSD分别为1.4%和1.1%，结果表明，供试品溶液在24 h内稳定性良好。
2.4.5 回收率试验 取已知质量分数的(2号样品)药材粉末9份，精密称定，每份0.5 g，3份为一组，每组按低、中、高浓度分别精密加入原薯蓣皂苷和薯蓣皂苷对照品溶液，按2.3项下操作，在2.1项下色谱条件下检测，计算得原薯蓣皂苷和薯蓣皂苷的平均回收率分别为98.5%、97.2%，RSD分别为1.7%、2.1%(n9)，说明该方法准确率高(表2)。
表2 原薯蓣皂苷和薯蓣皂苷的加样回收率(n9)
2.5 样品测定
分别取供试品溶液和对照品溶液，在2.1项下色谱条件下测定，以外标法计算各样品中原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷的含量，结果见表2。色谱图见图1。
2.6 相关分析
利用SPSS 16.0统计软件对原薯蓣皂苷和薯蓣皂苷的含量数据进行相关性分析，计算得Pearson简单相关系数r-0.615，双侧检验P0.000，在0.01水平上，两指标呈中度负相关，具有统计学意义。
2.7 主成分分析
将35组原薯蓣皂苷和薯蓣皂苷的含量数据进行主成分分析，两指标呈中度负相关；Bartlett检验相伴概率为0.000，说明样本数据来自多元正态总体，可以进行主成分分析。提取出一个主成分，特征值为1.615，方差贡献率为80.764%，该主成分代表80%以上两指标含量的信息。根
表3 穿龙薯蓣样品中原薯蓣皂苷和薯蓣皂苷的含量
据文献[10]使用软件compute功能，根据公式主成分得分值yFAC1_1×SQR(特征值) ......
1 材料与仪器
Agilent1100高效液相色谱仪，VWD紫外检测器，KQ3200超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，CP225D电子天平(德国Sartorius公司)。乙腈为色谱纯，乙醇(95%)为分析纯，水为重蒸水。薯蓣皂苷(自制，纯度≥98%)和原薯蓣皂苷(天津马克生物技术有限公司，纯度≥98%)。所用穿龙薯蓣药材收集于2009年7月-9月，见表1，经辽宁中医药大学药用植物教研室尹海波副教授鉴定，凭证标本保存于本院药用植物教研室。
表1 穿龙薯蓣药材样品来源信息
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Agilent TC-C18(5μm,4.6 mm×250 mm)；检测波长：203 nm；柱温：35℃；体积流量：1.0 mL·min-1；流动相：A-乙腈，B-水梯度洗脱：0～6 min，23%～25%A；6～10 min，25%～27%A；10～20 min，27%～46%A；20～25 min，46%～46%A；25～30 min，46%～56%A；30～37 min，56%A；进样量：20 μL。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取原薯蓣皂苷对照品27.75 mg，置25 mL容量瓶中，用10 mL蒸馏水溶解，再加入15 mL乙腈，稀释至刻度，摇匀制成每1 mL含1.11 mg的对照品溶液备用；精密称取薯蓣皂苷对照品35.00 mg，置50 mL容量瓶中，用甲醇溶解稀释至刻度，摇匀制成每1 mL含0.70 mg的对照品溶液备用。精密吸取两对照品溶液各5 mL，置容量瓶中摇匀备用。
2.3 供试品溶液的制备
精密称定穿龙薯蓣药材粉末0.5g，置100mL具塞锥形瓶中，加入30倍量75%乙醇，密塞，称重，超声处理30min，过滤后再加75%乙醇30倍量，超声处理30min后过滤，合并过滤液，浓缩定容于25mL容量瓶中，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液备用。
2.4 方法学考察
2.4.1 标准曲线绘制 精密量取原薯蓣皂苷和薯蓣皂苷对照品溶液4.0、6.0、8.0、10.0、12.0μL注入高效液相色谱仪中，以对照品进样量质量为横坐标，峰面积为纵坐标，得原薯蓣皂苷回归方程为：y338.75x-607.45，r0.999 8，线性范围为4.44～13.32μg；得薯蓣皂苷回归方程为：y637.23x-1146，r0.999 8，线性范围为2.8～8.4μg，结果表明线性关系良好。
2.4.2 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液10μL，重复进样6次，按照2.1项下色谱条件测定峰面积，原薯蓣皂苷和薯蓣皂苷的峰面积RSD分别为0.8%和0.7%(n6)。
2.4.3 重复性试验 精密称取混合均匀的(2号样品)药材粉末6份，按2.3项下制备供试品溶液，分别进样20 μL，按照2.1项下色谱条件测定峰面积并计算原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷的质量分数，RSD分别为2.4%和1.9%(n6)。
2.4.4 稳定性试验 精密吸取同一(2号样品)供试品试液，在室温下放置，分别于0、2、4、6、8、10、12、24 h测定原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷的峰面积， RSD分别为1.4%和1.1%，结果表明，供试品溶液在24 h内稳定性良好。
2.4.5 回收率试验 取已知质量分数的(2号样品)药材粉末9份，精密称定，每份0.5 g，3份为一组，每组按低、中、高浓度分别精密加入原薯蓣皂苷和薯蓣皂苷对照品溶液，按2.3项下操作，在2.1项下色谱条件下检测，计算得原薯蓣皂苷和薯蓣皂苷的平均回收率分别为98.5%、97.2%，RSD分别为1.7%、2.1%(n9)，说明该方法准确率高(表2)。
表2 原薯蓣皂苷和薯蓣皂苷的加样回收率(n9)
2.5 样品测定
分别取供试品溶液和对照品溶液，在2.1项下色谱条件下测定，以外标法计算各样品中原薯蓣皂苷、薯蓣皂苷的含量，结果见表2。色谱图见图1。
2.6 相关分析
利用SPSS 16.0统计软件对原薯蓣皂苷和薯蓣皂苷的含量数据进行相关性分析，计算得Pearson简单相关系数r-0.615，双侧检验P0.000，在0.01水平上，两指标呈中度负相关，具有统计学意义。
2.7 主成分分析
将35组原薯蓣皂苷和薯蓣皂苷的含量数据进行主成分分析，两指标呈中度负相关；Bartlett检验相伴概率为0.000，说明样本数据来自多元正态总体，可以进行主成分分析。提取出一个主成分，特征值为1.615，方差贡献率为80.764%，该主成分代表80%以上两指标含量的信息。根
表3 穿龙薯蓣样品中原薯蓣皂苷和薯蓣皂苷的含量
据文献[10]使用软件compute功能，根据公式主成分得分值yFAC1_1×SQR(特征值) ......
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