茶多酚预处理对β-淀粉样多肽致大鼠学习记忆障碍的改善作用(2)
参见附件(12kb)。
1 材料与方法
1.1 实验动物 主要试剂及仪器
SPF级健康雄性SD大鼠，体重200～230g，由温州医学院实验动物中心提供，颗粒饲料饲养，自由饮水，12 h/12 h光/暗环境。茶多酚(浙江东方茶业科技公司)，Aβ25-35(Sigma公司)，ChAT、AchE及考马斯亮兰测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)，标准品氯化乙酰胆碱为美国ACROS公司生产，毒扁豆碱(ALEXIS公司)，氯化羟胺、盐酸羟胺、三氯乙酸、三氯化铁等均为国产分析纯。Morris水迷宫及视频分析软件(上海吉量生物软件有限公司)。
1.2 动物分组与给药方法
动物被随机分为假手术组；模型组；TP 0.1g·kg-1(低剂量组)；TP 0.15g·kg-1(中剂量组)；TP0.28g·kg-1(高剂量组)，每组10只大鼠。给药组造模前2周按高、中、低3种不同剂量灌服茶多酚，造模后再连续灌服2周，每天1次。
1.3 动物模型的制作
用无菌生理盐水将Aβ25-35稀释成10μg·μL-1，37℃孵育1周，使其变为聚集状态。腹腔注射10%水合氯醛(3mL·kg-1)麻醉大鼠，然后将大鼠固定于立体定位仪上，常规备皮消毒，切开头部皮肤，参照大鼠脑立体定位图谱，定位双侧海马CA1区(以前囟为原点，向后3.0mm,，旁开2.2mm，颅骨表面下深度为2.8mm)。然后钻开颅骨，暴露硬脑膜，微量进样器自脑表面定位点垂直进针，缓慢将Aβ25-35 1μL注入，注射时间10 min，留针10 min，使Aβ25-35充分浸润局部组织，缝合切口，常规饲养。假手术组手术方法相同，注射同体积的生理盐水。
1.4 行为学检测
药物干预结束后，利用Morris水迷宫实验检测大鼠的记忆能力。Morris水迷宫由一直径130cm，高50cm的圆形水池组成，水深30cm。将水池分成4个象限，将站台固定置于第2象限中央，浸没于水下2 cm，水温(25±1)℃。水池周围贴有丰富的参照线索供大鼠用来定位平台。迷宫上方装有摄像头，大鼠行程可被记录下来。测试包括：①定位航行试验，历时5天，每天分上、下午两个时段，每个时段4次，分别从4个不同的标记点，将大鼠于象限边缘1/2弧度处头朝池壁放入水中，记录2 min内寻找平台所需时间(逃避潜伏期)。若大鼠入水后2 min内未能找到平台，则将其置于平台上并停留10 s，引导学习记忆，逃避潜伏期记录为2 min。每次训练间隔60 s。②空间探索试验，定位航行试验结束后撤除平台，任选一个入水点将大鼠面向池壁放入水中，记录2 min内跨越原平台位置的次数。
1.5 大鼠海马部位Ach含量及ChAT AchE活性检测
行为学测试完成后处死大鼠，于冰台分别迅速取大脑海马部位组织称重，加9倍体积的冷生理盐水，制成10%匀浆，4℃、3500 r/min离心10 min，取上清液，置于-20℃冰箱中待测。Ach含量采用Hestrin碱性羟胺比色法，蛋白质测定用考马氏亮兰比色法；ChAT、AchE活性检测严格按试剂盒说明程序进行测定。
1.6 统计学处理
行为学实验结果以X±sem表示，其他数据用X±sd表示，用SPSS 13.0进行数据统计分析。Morris水迷宫定位航行实验中的潜伏期利用重复测量的方差分析进行统计，Morris水迷宫空间探索实验中，大鼠在目的象限的停留时间，穿越原站台所在位置的次数，以及Ach、ChAT和AchE的比较利用单因素方差分析法。两组间比较按照方差是否齐同而采用LSD或Dunnett’s T3方法进行，以P<0.05为统计检验的显著性界值。
2 结 果
2.1 茶多酚对AD模型大鼠学习记忆能力的影响
2.1.1 定位航行实验 结果表明，随着学习时间的延长，各组大鼠的逃避潜伏期都表现出了降低趋势。模型组平均逃避潜伏期较假手术组明显延长(P<0.01) ......
1 材料与方法
1.1 实验动物 主要试剂及仪器
SPF级健康雄性SD大鼠，体重200～230g，由温州医学院实验动物中心提供，颗粒饲料饲养，自由饮水，12 h/12 h光/暗环境。茶多酚(浙江东方茶业科技公司)，Aβ25-35(Sigma公司)，ChAT、AchE及考马斯亮兰测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)，标准品氯化乙酰胆碱为美国ACROS公司生产，毒扁豆碱(ALEXIS公司)，氯化羟胺、盐酸羟胺、三氯乙酸、三氯化铁等均为国产分析纯。Morris水迷宫及视频分析软件(上海吉量生物软件有限公司)。
1.2 动物分组与给药方法
动物被随机分为假手术组；模型组；TP 0.1g·kg-1(低剂量组)；TP 0.15g·kg-1(中剂量组)；TP0.28g·kg-1(高剂量组)，每组10只大鼠。给药组造模前2周按高、中、低3种不同剂量灌服茶多酚，造模后再连续灌服2周，每天1次。
1.3 动物模型的制作
用无菌生理盐水将Aβ25-35稀释成10μg·μL-1，37℃孵育1周，使其变为聚集状态。腹腔注射10%水合氯醛(3mL·kg-1)麻醉大鼠，然后将大鼠固定于立体定位仪上，常规备皮消毒，切开头部皮肤，参照大鼠脑立体定位图谱，定位双侧海马CA1区(以前囟为原点，向后3.0mm,，旁开2.2mm，颅骨表面下深度为2.8mm)。然后钻开颅骨，暴露硬脑膜，微量进样器自脑表面定位点垂直进针，缓慢将Aβ25-35 1μL注入，注射时间10 min，留针10 min，使Aβ25-35充分浸润局部组织，缝合切口，常规饲养。假手术组手术方法相同，注射同体积的生理盐水。
1.4 行为学检测
药物干预结束后，利用Morris水迷宫实验检测大鼠的记忆能力。Morris水迷宫由一直径130cm，高50cm的圆形水池组成，水深30cm。将水池分成4个象限，将站台固定置于第2象限中央，浸没于水下2 cm，水温(25±1)℃。水池周围贴有丰富的参照线索供大鼠用来定位平台。迷宫上方装有摄像头，大鼠行程可被记录下来。测试包括：①定位航行试验，历时5天，每天分上、下午两个时段，每个时段4次，分别从4个不同的标记点，将大鼠于象限边缘1/2弧度处头朝池壁放入水中，记录2 min内寻找平台所需时间(逃避潜伏期)。若大鼠入水后2 min内未能找到平台，则将其置于平台上并停留10 s，引导学习记忆，逃避潜伏期记录为2 min。每次训练间隔60 s。②空间探索试验，定位航行试验结束后撤除平台，任选一个入水点将大鼠面向池壁放入水中，记录2 min内跨越原平台位置的次数。
1.5 大鼠海马部位Ach含量及ChAT AchE活性检测
行为学测试完成后处死大鼠，于冰台分别迅速取大脑海马部位组织称重，加9倍体积的冷生理盐水，制成10%匀浆，4℃、3500 r/min离心10 min，取上清液，置于-20℃冰箱中待测。Ach含量采用Hestrin碱性羟胺比色法，蛋白质测定用考马氏亮兰比色法；ChAT、AchE活性检测严格按试剂盒说明程序进行测定。
1.6 统计学处理
行为学实验结果以X±sem表示，其他数据用X±sd表示，用SPSS 13.0进行数据统计分析。Morris水迷宫定位航行实验中的潜伏期利用重复测量的方差分析进行统计，Morris水迷宫空间探索实验中，大鼠在目的象限的停留时间，穿越原站台所在位置的次数，以及Ach、ChAT和AchE的比较利用单因素方差分析法。两组间比较按照方差是否齐同而采用LSD或Dunnett’s T3方法进行，以P<0.05为统计检验的显著性界值。
2 结 果
2.1 茶多酚对AD模型大鼠学习记忆能力的影响
2.1.1 定位航行实验 结果表明，随着学习时间的延长，各组大鼠的逃避潜伏期都表现出了降低趋势。模型组平均逃避潜伏期较假手术组明显延长(P<0.01) ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(12kb)。