2 化学实验

    绒毛细胞培养:于手术室中无菌条件下取绒毛,放置于生理盐水或培养液中送实验室,充分减碎并胰酶消化,刚消化后的细胞膜存在损伤,用四孔培养板培养3天后的细胞作为检测对象。

    复方紫草汤溶液配制：取一剂本院机器煎成的复方紫草汤溶液100mL,无菌纱布过滤备用。以每5mL培养液中分别加1，2滴复方紫草汤溶液刺激2h后观察。

    AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测绒毛细胞凋亡，本试剂盒为碧云天生物技术研究所生产，是用FITC标记的重组AnnexinV来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷酯酰丝氨酸的一种细胞凋亡检测试剂盒。Annexin是一类广泛分布于真核细胞细胞浆内钙离子依赖的磷酯结合蛋白，参与细胞内的信号转导。AnnexinV选择性结合磷酯酰丝氨酸。磷酯酰丝氨酸主要分布在细胞膜内侧，在细胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷酯酰丝氨酸外翻到细胞表面，即细胞膜外侧。带有绿色荧光的荧光探针FITC标记的AnnexinV用荧光显微镜可以非常简单而直接地检测到磷酯酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。本试剂盒还提供了碘化丙啶染色液，它可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞，呈现红色荧光。对于坏死细胞，由于细胞膜的完整性已丧失，AnnexinV- FITC可以进入到细胞浆内，与位于细胞膜内侧的磷酯酰丝氨酸结合，从而也使坏死细胞呈现出绿色荧光。见插页Ⅶ图1。

    经过复方紫草汤溶液刺激的绒毛细胞可以明显地观察到FITC显现的绿色荧光，低浓度复方紫草汤溶液培养的绒毛细胞大部份仅见到FITC的荧光，而高浓度复方紫草汤溶液培养的绒毛细胞可同时见到FITC及碘化丙啶的双重染色 ......