补肾填精方对Aβ1-40所致老年性痴呆模型大鼠行为学及病理学的影响(2)
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参见附件。
1.5.2 学习记忆能力检测 采用Morris水迷宫法。各组大鼠于给药后第14天进行测试。测试在给药30min后进行，各组大鼠平行操作。测试参考文献[5-7]方法设计，平台设于迷宫东北象限正中，水平面高出平台1.5 cm，水温保持(20±1)℃。各组大鼠连续训练5天，每天测定时大鼠分别从正西、正南两个点放入迷宫，每天1次，设定最长游动时间为70 s，记录大鼠找到平台所需时间即为潜伏期。
1.5.3 脑组织病理检测各实验组大鼠均在水迷宫行为学测试结束后每组随机取1只，打开胸腔，从左心室插管至升主动脉同时剪开右心耳。先以生理盐水快速冲洗，再用4%多聚甲醛进行灌注固定，之后取脑组织，放入4%多聚甲醛溶液中保存。标本梯度乙醇脱水(50%、70%、80%、90%、100%丙酮各15 min，100% 2 次，各10 min)，环氧树脂包埋，切片，染色，透射电镜观察海马CA1区的神经元的结构变化及突触结构变化。于每个标本海马区神经细胞胞体周围神经毡上随机拍摄4张照片。
1.6 数据统计
实验数据用均数±标准差(±s)表示，SPSS 11.5统计软件对数据进行统计分析，采用重复测量数据的方差分析方法。
2 结 果
2.1 补肾填精方对AD大鼠学习记忆能力的影响
通过水迷宫实验，观察各组大鼠行为学表现，发现各组大鼠随着训练时间的延长，到达平台的时间明显缩短。第5天模型组与空白组相比，其潜伏期明显延长，两者差异有着明显的统计学意义(P<0.01)，提示模型组大鼠学习记忆能力降低；各给药组与模型组相比，潜伏期出现明显缩短趋势，第5天补肾填精方大剂量组与模型组相比，差异明显，具有统计学意义(P<0.05)，见表1。
2.2 补肾填精方对AD模型大鼠海马CA1区神经元、突触改变的影响
2.2.1 补肾填精方对AD模型大鼠海马CA1区神经元的影响 空白组：神经元胞核为椭圆形，核膜完整，核仁明显，位置居中，胞核周围可见较多神经纤维分布；胞核周围有突触散在分布。模型组：神经元细胞核缩小非常显著，形状不规则，无核仁，异染色质边集，胞浆中基质空化严重；部分线粒体、粗面内质网排列失序，线粒体大小不一。补肾填精方小剂量组：神经元胞核近似椭圆，稍有凝集，核仁不显著，胞浆基质空化有所减轻；粗面内质网虽有扩张但未成空化。补肾填精方中剂量组：较小剂量组有所改善，胞浆内仍有空化，核仁显著，位置居于胞核中央，但边缘欠光滑；粗面内质网排列明显。补肾填精方大剂量组：与空白组相似，胞核形态正常为椭圆形，核膜完整，核内异染色质略有边集，核仁明显，位于胞核中央。双益平组：与模型组比较，神经元胞核为椭圆形，但核仁未见；核内空化较多，线粒体大小不一，核基质缺少。见图1。
2.2.2 补肾填精方对AD模型大鼠海马CA1区突触的影响 空白组：海马神经元树突、轴突较密集，突触小泡多，突触结构清晰、数量多。模型组：海马神经元和神经毡水肿，部分神经细胞固缩，核染色质边集；线粒体肿胀、畸形，嵴断裂、溶解；突触小泡大小不等、体积变小、数量变少，突触大小、形态各异，部分突触连接间断、间隙模糊不清，突触结构不完整、数量明显减少。补肾填精方小剂量组：与模型组相似，略有改善，突触数量略有增加。补肾填精方中剂量组：与模型组相比，突触小泡数量较多，突触结构较清晰、数量较多。补肾填精方大剂量组：与空白组相似，突触小泡多，突触结构清晰、数量多。双益平组：与中药小剂量组相似，突触数量比模型组略有增加，部分突触连接间断、间隙模糊不清，突触小泡数量少。见图2。
3 讨 论
老年性痴呆作为一种衰老相关疾病，是人体全面衰老的表现，以脑的记忆、思维、精神、情志、感知、运动等功能衰退及异常为主要表现的一种整体性的身心疾病。 祖国医学认为，其根本在于肾精亏虚。我们认为随增龄而发生的肾精亏损，肾气不足，脑髓不充，元神失于髓之荣贯穿于老年性痴呆的始终[8]。补肾填精方具有补肾生髓，佐以活血化痰，醒脑开窍功效的，用于临床，疗效肯定。前期研究也证实补肾填精方在延缓细胞衰老、脑衰老方面有着显著作用[1-2]。
研究表明Aβ蛋白级联反应在老年性痴呆发病中起重要作用，现已成为老年性痴呆的治疗靶标[9]，本次研究采用Aβ1-40造模，结果表明补肾填精方对Aβ1-40所致老年性痴呆模型大鼠空间学习记忆能力有着比较明显的改善作用。目前关于老年性痴呆的研究认为，海马神经元及其突触结构完整是正常学习记忆的基础之一。海马CA1区与学习记忆功能密切相关，突触是神经信息传递的关键部位，海马神经元和突触结构和功能的完整性是维持学习记忆的前提，CA1区神经元损失、丢失是老年性痴呆的重要病理特征[10-11]。补肾填精方对Aβ1-40所致老年性痴呆模型大鼠海马CA1区神经元、突触损伤有着积极的防护作用。无论是神经元、突触的形态结构，还是突触数量上与模型组形成鲜明反差。这可能与补肾填精方能够补肾填精，生髓，充于脑，脑髓充实，保障了海马CA1区神经元、突触结构从而促进脑功能发挥有一定关系。该复方使Aβ1-40造成大鼠脑功能损伤得以改善，从而使脑的记忆等功能得以充分发挥，以较快速度、较短时间游上平台，提示补肾填精方对老年性痴呆具有一定治疗效应。从一个侧面证实了中医“精为体，神为用”以及“形为神之宅，神乃形之主”理论，也就是现代医学认为的脑髓充实，脑功能正常，脑是生命主宰，调控人的精神及一切活动使之正常。
综上所述，本研究表明补肾填精方能改善Aβ1-40所致老年性痴呆模型大鼠行为学及脑组织的病理损害，提示补肾填精方可以用于老年性痴呆的治疗。
参考文献
[1] 安红梅，史云峰，史秀峰，等. 补肾填精方对D-半乳糖衰老模型大鼠脑细胞周期相关蛋白表达的影响[J]. 中南药学，2009，7(3)：161-164.
[2] 史云峰，安红梅，胡兵. 补肾填精方对D-半乳糖衰老模型大鼠学习记忆能力和脑组织抗氧化能力的影响[J].中华中医药学刊，2009，27(10)：2164-2166.
[3] 姚柏春，袁华，黄翔，等.绞股蓝对海马注射Aβ1-40大鼠脑内细胞周期蛋白表达和钙稳定变化的影响[J].中国病理生理杂志，2006，22(8)：1618-1622.
[4] 牛英才，董妙先，兴桂华，等. Aβ1-40脑内注射对大鼠海马AchE和NOS1表达的影响及加减地黄饮子的干预作用[J].中药药理与临床，2007，23 (5):149-151.
[5] 杨戈，李美华，金红妹，等.调心方有效部位和EGb761对双侧杏仁核注射致痴呆大鼠APP mRNA、Aβ阳性神经元和乙酰胆碱酯酶作用比较[J].天津中医药，2006，23(1)：12-16.
[6] 郁志华，王东健，林水淼.调心方有效部位TX0201对类AD模型大鼠学习记忆和细胞凋亡相关基因的影响[J].中国中药杂志，2007，32(9)：839-842.
[7] 汪保华，袁华，吕志华，等.灵芝多糖对AD学习记忆障碍大鼠海马白细胞介素-6表达的影响[J].卒中与神经疾病，2007，14(4)：206-209、213 ......
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