优化HPLC法测定淡豆豉中大豆异黄酮的含量(1)
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摘 要：目的：优化淡豆豉中大豆异黄酮的高效液相色谱含量测定方法。方法：采用色谱柱为Agilent Hypersil C18(4.0 mm×250 mm ,5μm) ,流动相为甲醇- 0.09 %醋酸(48：52) ,流速1.0 mL•min-1,测定波长为254 nm,检测温度为25 ℃的色谱条件测定。结果：线性范围：大豆苷40.6～203μg(r=0.9998)，染料木苷11.15～55.75μg(r=0.9926)，大豆苷元12.05～60.25μg (r=0.9933)，染料木素5.5～27.5μg(r=0.9946)。测定精密度：大豆苷RSD=1.59%，染料木苷RSD=1.7%，大豆苷元RSD=0.8%，染料木素RSD=1.6%。大豆异黄酮总量24h稳定性RSD=1.49%，重复性RSD=1.06%，加样回收率：大豆苷为(99.24±3.77)%，染料木苷为(99.66±5.82)%，大豆苷元为(99.41±4.33)%，染料木素为(99.06±7.09)%。结论：本法简便、可靠、灵敏，可作为大豆异黄酮的质量控制方法。
关键词：淡豆豉片； 大豆异黄酮； HPLC
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2012)01-0182-03
Improvement of Content Determination of Soy Isoflavon from Semen Sojae praeparatum
LIU Qing1, XU Fenghua2, LI Yongsheng2
(1.Hebei North University,Zhangjiakuo 075000,Hebei,China;
2.Chinese PLA General Hospital，Beijing 100853,China)
Abstract:Objective: To improve the HPLC method for the content determination of soy isoflavon from Semen Sojae praeparatum. Method: Isoflavone was analyzed on a Agilent Hypersil C18 column (4.0mm×250mm, 5μm). A mixture of MeOH-0.09 % HAc (48∶52) was used as the mobile phase with a flow rate of 1.0mL•min-1. The detecting wavelength was 254 nm at 25℃. Result: The quantitative linear ranges of four isoflavones were daidzin 40.6～203μg(r=0.9998), 11.15～55.75μg(r=0.9926)，daidzein 12.05～60.25μg(r=0.9933)，genistein 5.5～27.5μg(r=0.9946)，the precisions were RSD=1.59%，RSD=1.7%，RSD=0.8%，RSD=1.6%，the stability of isoflavonoids in 24h was RSD=1.49%，reproducibility RSD=1.06%.The recoveries of daidzin was (99.24±3.77)%，genistin was 99.66±5.82%，daidzein was (99.41±4.33)%，genistein was (99.06±7.09)% .Conclusion:The method is convenient,reliable and sensitive so it can be used for the quality control of soy isoflavone.
Key words:Semen Sojae praeparatum; Isoflavone; HPLC
淡豆豉是由大豆的成熟种子经发酵加工而成的制品，始载于《名医别录》[1]，具有解表除烦、宣发郁热等功效[2]。其主要成分大豆异黄酮具有具有双相调节机能： 对于低雌激素水平者可起到雌激素样功能，可预防妇女更年期激素消退时产生的疾病，如骨质疏松、血脂升高等；对于高雌激素水平者可产生抗激素功能，同时还具有抗肿瘤和活化免疫调节等作用[3]。淡豆豉含有大豆中的12种异黄酮类组分,分为游离型的苷元和结合型的糖苷两类,其中含量较高的两种苷元成分为染料木素和大豆素,含量较高的两种糖苷类成分为染料木苷和大豆苷。《中华人民共和国药典》2010年版，对淡豆豉规定了形状和显微鉴别，其中有效成分大豆异黄酮的含量并没有具体测定方法。有文献[4-5]报道采用紫外分光光度法测定大豆异黄酮含量，但其只以染料木素做异黄酮总含量计算，有一定的局限性，代表性不强。牛丽颖等对淡豆豉中的大豆异黄酮上述4种主要成分进行了的含量测定[6]，但其方法采用梯度洗脱，操作繁琐，大豆异黄酮保留时间较长，需50 min左右才能完全出峰，且杂质峰较多，不利于图谱的分析。我们建立了高效液相色谱法测定大豆异黄酮的含量的方法,流动相组成简单 ......
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