抗疲劳中药对小鼠抗疲劳及调节免疫作用的研究(2)
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参见附件。
1.5力竭性游泳运动试验小鼠游泳池选用大小为80cm×60cm×60cm 的玻璃水槽,训练时注水深约40cm,水温(22±1)℃,各实验组小鼠置于水中同池游泳且不互相接触,从第1周开始予以适应性训练,每次游泳20min。小鼠末次灌胃30min后,放入水槽内进行游泳实验,每鼠尾部负重为体重的4%,记录每只小鼠游泳持续时间。小鼠游泳时间:小鼠置于水中后立即计时,当小鼠头部沉入水面10s不能浮出,即刻计时为小鼠游泳时间。
1.6吞噬指数及免疫器官指数连续灌胃给药14天，给药第10天每只鼠腹腔注射5%的可溶性淀粉1mL，于第14天给药后每只鼠腹腔注射1%鸡血红细胞，1～1.5h后小鼠断椎处死，固定、腹部消毒，腹腔注射1mL生理盐水，按摩腹腔，在腹部中央将皮肤剪一小口，吸取约0.2mL腹腔液，将腹腔液滴于载玻片上涂片，将玻片放在湿盒内，置37℃温箱中孵育30min，取出，用生理盐水淋洗，晾干后用Giemsa-wright 染液染色5min，生理盐水淋洗，晾干后油镜下观察，计数200个吞噬细胞中吞噬的鸡血红细胞数,吞噬力=吞噬红细胞的巨噬细胞数/200个巨噬细胞[4]。取胸腺及脾脏, 称其质量并分别计算其与体重比值,为相应小鼠免疫器官指数。
1.7统计学分析采用SPSS 12.0统计软件进行分析, 各组数据分别以平均数±标准差“±s”表示,组间差异比较用单因素方差分析,差异有统计学意义时再用最小显著差值法(LSD)进行两两比较。
2结果
2.1抗疲劳中药对对小鼠体质量、一般情况的影响实验初始、中期、终末的体质量与对照组相比，差异均无显著性(P>0.05) 。实验期间生理盐水组和抗疲劳中药复方红景天复方高、中、低剂量组饮食好,毛发光泽,体格较强悍,动作敏捷。
2.2各组对小鼠负重游泳时间、爬竿时间的影响抗疲劳中药复方能延长小鼠负重游泳的时间以及爬竿时间；随着抗疲劳中药复方给药剂量增加,小鼠负重游泳时间逐渐延长,大剂量组的负重游泳时间、爬竿时间明显延长，与生理盐水组比较差异性显著(P<0.05)，见表1。
表1抗疲劳中药对小鼠负重游泳时间、爬竿时间的影响(n=10，±s)
分组剂量
(g/kg)游泳时间(s)爬杆时间(s)生理盐水对照组09.23±3.866.47±3.62抗疲劳小剂量组1012.43±4.647.76±4.12抗疲劳中剂量组3014.52±4.429.35±4.63抗疲劳大剂量组9016.21±5.26*11.32±5.28*注：与生理盐水对照组比较,*P<0.05。
2.3抗疲劳中药复方对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、脾指数、胸腺指数的影响抗疲劳中药复方能够增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、脾指数、胸腺指数；与生理盐水组比较，高剂量抗疲劳中药复方能够明显增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、脾指数，P<0.05，见表2。
表2抗疲劳中药对小鼠巨噬细胞吞噬指数、脾指数、胸腺指数影响(n=10，±s)
分组剂量
(g/kg)吞噬百分率%脾指数胸腺指数生理盐水对照组04.12±1.162.81±0.541.51±0.32抗疲劳小剂量组105.43±1.643.26±0.621.62±0.43抗疲劳中剂量组306.52±1.423.68±0.591.69±0.58抗疲劳大剂量组907.56±1.36*4.42±0.64*1.76±0.49注：与生理盐水对照组比较,*P<0.05。
3讨论
疲劳是机体在一定环境条件下, 由于长时间或过于繁重、紧张的劳动(包括脑力和体力)而引起的工作效率暂时降低的一种生理心理现象。游泳是全身消耗性运动, 剧烈的运动消耗大量的能量。本研究中以生理盐水作为对照, 观察到益气健脾、补肾调理中药复方对小鼠负重游泳持续时间、鼠爬竿时间明显长于生理盐水组，说明该方具有提高小鼠抗运动性疲劳的作用，提高小鼠静止耐力的作用，说明该方能起到抗疲劳的作用。慢性疲劳综合症患者的发病相当一部分是由于脑力活动过度,精神情志刺激, 而致脑神耗伤过度, 不能正常地主持调节心神, 进而出现神疲乏力的表现[5-6]。在临床上应用：益气阴、健脾肾、调心肝的中医治疗方法，我们采用抗疲劳中药复方治疗慢性疲劳综合症患者取得了较好的疗效。
现代研究表明,多数疲劳患者存在免疫系统功能的紊乱, 尤其是细胞因子与疲劳症状的出现关系密切[7],疲劳患者可出现免疫功能下降, T 细胞和B 细胞是机体免疫系统内功能最重要的免疫细胞，胸腺和脾脏是机体的重要免疫器官。所以T 细胞、B 细胞、胸腺指数和脾脏指数是反映机体免疫状态的重要指标。机体免疫功能下降会导致机体防御、识别及排除外来病原微生物和自身产生的抗原性异物的能力下降, 从而难以维持机体内环境生理平衡, 导致疾病的产生[8]。胸腺和脾脏是人体最重要的中枢和外周免疫器官之一, 胸腺指数和脾脏指数能反映二者的发育和功能状况, 间接反映了机体的免疫水平[7-8]。巨噬细胞作为调节炎症疾病的靶细胞受到国内外学者的关注, 在免疫系统受到自身抗体或特殊抗原刺激时, 活化的巨噬细胞成为炎症介质的主要来源[9]。本研究结果显示抗疲劳中药复方高剂量组可使脾脏指数显著增加、可使小鼠吞噬指数增高，说明该方可能具有增强小鼠机体免疫功能。
本研究表明抗疲劳中药复方能明显延长小鼠负重游泳持续时间、爬竿时间, 具有提高小鼠机体抗疲劳的作用, 该作用可能与其增强小鼠免疫器官功能相关, 其具体作用机制还需进一步深入研究。中医药始终强调预防为主、寓防于治、防治结合的健康理念。而CFS 的发病归根结底是由现代生活方式所致,因此先期防治，整体调节，未病先防，治疗、预防、保健三者兼顾是抗疲劳的关键。
参考文献
[1]Holmes G P，Kap lan J E，Gantz N M，et al. Chronic fatigue syndrome;H working case definition[J].Ann Intern Med，1988，108:387-389.
[2]王天芳，王琳，张翠珍.慢性疲劳综合征的研究进展[J].中国公共卫生，2002 ......
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