正交试验设计优化桑叶总生物碱提取工艺(2)
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3讨论
3.1水煎煮提取工艺生物碱的提取一般采用水或酸水提取法、醇类溶剂提取法和亲脂性有机溶剂提取法[7]。桑叶总生物碱主要为多羟基生物碱及其苷类化合物，具有较强的水溶性[5]，适宜采用传统水煎煮提取法。如果需要进一步分离纯化总生物碱，得到的水提液经过简单有效的处理即可完成，例如将水提液浓缩，加入乙醇沉淀除去桑叶多糖类物质，药液回收乙醇后采用生物碱沉淀试剂分离生物碱或采用离子交换树脂分离生物碱。
3.2桑叶生物碱的含量测定目前桑叶生物碱的含量测定方法主要有：重量法[8]，可见分光光度法[9]，高效液相色谱法(HPLC)[10-13]，气相色谱法(GC)[14]和液相色谱-质谱联用法(LC-MS)[15]。由于桑叶多羟基生物碱化学结构缺乏生色基团，在紫外和可见光范围内没有吸收，因此无法直接采用一般光谱分析方法，必须将生物碱衍生化[10, 11]再进行分析或者使用一些通用型检测器如蒸发光散射检测器(ELSD)[12]、示差折光检测器(RID)[13]进行分析。这些光谱或质谱分析方法具有灵敏度高、结果准确可靠等优点，但上述一些检测器如荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、质谱检测器价格昂贵，故在应用普及方面会受到较大限制。本文采用经典的沉淀重量法[6, 8]测定桑叶总生物碱含量具有操作简单、快捷，不需要复杂仪器，不需要使用昂贵的对照品(如DNJ)等优点。本方法的原理是采用生物碱沉淀试剂硅钨酸与桑叶总生物碱产生沉淀，称定此沉淀重量，换算出生物碱含量。桑叶生物碱为一元碱，与硅钨酸沉淀形式应为SiO3·12WO3·4R·2H2O，因此理论化学换算因数为0.1856(4R/ SiO3·12WO3·4R·2H2O)。鉴于本方法采用生物碱沉淀试剂有可能对非生物碱成分如多肽、蛋白质产生沉淀影响含量测定结果[6]，将样品液加入乙醇沉淀，得到的不溶性成分(含多糖、多肽、蛋白质等)用水溶解后与生物碱沉淀试剂硅钨酸反应，结果未见沉淀产生，表明桑叶中多肽、蛋白质的存在不影响生物碱的含量测定。
3.3正交试验设计正交试验设计优化桑叶总生物碱提取工艺中，以总生物碱含量为评价指标，对煎煮时间和加水量两个因素进行了考察。考察因素选用3水平，水平范围符合一般生产要求。试验结果表明加水量是影响总生物碱含量的显著性因素，可能因为药材原料质地轻体积大，需要更多提取溶剂才能充分煎煮获得高提取效率。本试验没有对提取次数进行考察有以下原因：(1)工业化生产考虑到成本效益因素一般提取2~3次，按生产经验更普遍地提取2次；(2)提取次数为非独立性因素，与煎煮时间和加水量两个因素存在联系，可能不符合正交试验因素设计原则[16]。
4结论
正交试验设计优选得到的工艺稳定、可行，提取得到桑叶总生物碱含量高。
参考文献
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