蜂房对H22肝癌荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研究(2)
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参见附件。
1.2.2动物模型制备及给药处理在无菌条件下，抽取传代7天的腹水型H22小鼠腹水，用生理盐水调至细胞浓度为5×106个·mL-1。40只小鼠右前腋窝下以75%乙醇消毒，皮下注射配制好的H22肝癌细胞悬液0.1mL，细胞总数约为5×105个，以出现皮丘为接种成功。将40只小鼠随机分为盐水对照组、氟尿嘧啶组、蜂房高剂量组和蜂房低剂量组，每组10只。24 h后称重，盐水对照组以生理盐水10mL·kg-1·d-1灌胃，氟尿嘧啶组以20mg·kg-1·d-1腹腔注射，蜂房高剂量组以2.0g·kg-1·d-1灌胃，蜂房低剂量组以1.0g·kg-1·d-1灌胃，连续给药14天。观察小鼠生存状态，作为评测药物毒性的指标[5]；第15天颈椎脱臼法处死小鼠，称取体重，剥离瘤组织，解剖肝、脾、肾，分别称重，经病理证实瘤组织是肝癌腹水瘤细胞系细胞株所致的实体瘤。计算抑瘤率、肝/体比、肾/体比、脾脏指数以及用药前后的体重变化等指标。
抑瘤率(%)=(对照组平均瘤质量-实验组平均瘤质量)/对照组平均瘤质量×100%。
脾指数=脾脏质量(mg)/体质量(g)×10。
1.2.3统计学处理采用SPSS 11.0统计软件分析,计量资料数据均以±s表示，多组间均数比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD法。治疗前后体重变化比较采用配对t检验，P<0.05提示差异有统计学意义。P<0.01提示有非常显著性差异。
2结果
2.1小鼠一般状况及肿瘤生长
各组小鼠在接种H22细胞后第2天，即可在右腋下注射部位触及稍突起于皮面的米粒大小瘤结节，造模成功率100%。瘤块逐渐生长，外观呈球形或半球形，初期可活动，逐渐变硬。早期荷瘤小鼠身形匀称，动作敏捷，反应灵活，皮毛光滑，进食进水正常；随着实验时间的延长，部分小鼠逐渐出现状态欠佳，进食饮水量减少，活动减少，行动迟缓，皮毛失去光泽等现象，而以氟尿嘧啶组表现最明显。从饮食、活动及毛发色泽来看，蜂房组小鼠生存质量和生存状态均明显高于氟尿嘧啶组。
2.2瘤质量、抑瘤率的测定
氟尿嘧啶组、蜂房高、低剂量组与盐水对照组比较均有非常显著性差异(P<0.01)。蜂房高、低剂量组与氟尿嘧啶组比较有显著性差异(P<0.05)。3组抑瘤率分别为：氟尿嘧啶组52.06%、蜂房高剂量组31.96%、蜂房低剂量组27.84%。可见氟尿嘧啶抑瘤作用明显优于蜂房各剂量组。蜂房高剂量组虽优于蜂房低剂量组，但未见统计学意义(P>0.05)，见表1。
表1各组瘤质量及抑瘤率的比较(n=10，±s)组别瘤质量(g)抑瘤率(%)盐水对照组1.94±0.58-氟尿嘧啶组0.93±0.28▲52.06蜂房高剂量组1.32±0.28▲●31.96蜂房低剂量组1.40±0.31▲●★27.84注:与盐水对照组比较，▲P<0.01；与氟尿嘧啶组比较，●P<0.05；与蜂房高剂量组比较，★P>0.05。
2.3荷瘤小鼠治疗前后体重比较
经治疗后氟尿嘧啶组中的小鼠，无论是与盐水对照组比较还是与治疗前比较，体重均明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)，蜂房各组小鼠体重与治疗前及盐水对照组相比变化不明显(P>0.05)，见表2。
表2肝癌H22荷瘤小鼠体重变化比较(n=10，±s)组别给药前体重(g)给药后体重(g)体重差值(g)盐水对照组23.23±1.7623.80±1.830.57±1.83氟尿嘧啶组24.60±1.7617.33±1.67★▲-7.27±2.38★蜂房高剂量组23.60±2.0523.94±2.77●☆0.34±1.97●蜂房低剂量组23.84±1.9724.41±2.27●☆0.57±1.57●注：与盐水对照组比较，★P<0.01,●P>0.05；与治疗前比较，▲P<0.01，☆P>0.05。
2.4荷瘤小鼠肝/体比、肾/体比、脾脏指数比较
蜂房高、低剂量组与氟尿嘧啶组比较，肝/体比、脾脏指数差异有统计学意义(P<0.01)，肾/体比未见显著性差异(P>0.05)，氟尿嘧啶组与盐水对照组比较，肝/体比、脾脏指数、肾/体比均有显著性差异(P<0.01)，而蜂房高、低剂量组与盐水对照组比较，肝/体比、脾脏指数、肾/体比均未见显著性差异(P>0.05)，见表3。
表3肝癌H22荷瘤小鼠肝/体比、肾/体比、脾脏指数的影响(n=10，±s)组别肝/体比(mg·g-1)肾/体比(mg·g-1)脾脏指数(mg·g-1)盐水对照组63.42±8.4118.99±1.9879.69±31.87氟尿嘧啶组46.18±6.04▲16.45±1.82▲37.16±15.68▲蜂房高剂量组65.69±8.40★☆17.03±2.02●☆82.82±21.82★☆蜂房低剂量组63.59±10.13★☆17.72±2.11●☆85.23±18.71★☆注：与氟尿嘧啶组比较，★P<0.01,●P >0.05；与盐水对照组比较，▲P<0.01,☆P>0.05。
3讨论
肝癌是我国常见恶性肿瘤之一，其发病隐匿，恶性程度高，生存期短，死亡率高。当前，对肝癌的治疗仍以手术切除为首要措施，但在临床病例中，大多数患者已无手术指征，不适宜根治性切除[6]。而传统的抗癌药物难以避免选择性差，在杀灭恶性肿瘤细胞的同时对机体的正常细胞也有伤害作用，产生机体免疫功能严重下降等不良作用，因此，具有抑瘤作用且不良反应小的抗肿瘤药物逐渐成为研究热点。蜂房(nidus vespae)为胡蜂科昆虫果马蜂(Polistes olivaceous DeGeer)、日本长脚胡蜂(Polistes japonicus Saussure)或异腹胡蜂(Parapolybia varia Fabricius)的巢，又名露蜂房、蜂肠、野蜂房、马蜂窝等。本品性平味甘，归肝、胃、肾经，具有祛风止痛，攻毒消肿，杀虫止痒等功效，用于疮疡、肿毒、乳痈、瘰疬、皮肤顽癣等，在治疗恶性肿瘤的中医处方中常用到蜂房。有研究[7]用不同提取方法分别保留蜂房中的相应活性部位，观察了其对胃癌细胞BGC823细胞株体外增殖的影响，结果显示，蜂房各活性部位均显示出一定的抗肿瘤作用。另有实验表明[8]蜂房甲醇提取物对人胃腺癌细胞(SGC7901)、口腔上皮癌细胞(KB)、人宫颈癌细胞(HeLa)、人非小细胞肺癌细胞(H460)和人肝癌细胞(HepG2)均表现抑制作用，具有抗肿瘤活性，并与浓度呈明显的量效关系。
本实验通过建立H22 荷瘤小鼠动物模型，观察了蜂房对小鼠移植性肝癌H22肿瘤生长的抑瘤率、肝/体比、肾/体比、脾脏指数以及用药前后的体重变化等指标。实验结果表明，蜂房确实具有良好的体内抗肿瘤作用，高、低剂量组的抑瘤率分别为31.96%、27.84%，与盐水对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)，但与氟尿嘧啶组比较抑瘤作用还是具有一定差距(P<0.05)。但氟尿嘧啶对H22 荷瘤
收稿日期：2011-10-26
作者简介：陈红(1966-)，女，浙江建德人，主管中药师，研究方向：中药饮片质量管理及成分研究。小鼠在具有明显的抗肿瘤作用同时 ......
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