纤维素酶水解栀子苷的工艺条件研究(1)
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摘 要：目的：考察纤维素酶水解栀子苷制备栀子苷元的最佳工艺条件。方法：采用单因素实验设计，考察反应温度、反应时间、水解介质的pH值3个因素对纤维素酶水解栀子苷制备栀子苷元的影响，确定纤维素酶水解栀子苷制备栀子苷元法的最佳反应条件。结果：纤维素酶水解栀子苷制备栀子苷元的最佳工艺条件为：纤维素酶水解的反应温度为50℃，反应时间为2h，水解介质的pH值为5.1。结论 纤维素酶水解栀子苷制备栀子苷元的最佳工艺条件合理、可行，所得栀子苷元纯度较高。
关键词：栀子苷;栀子苷元;水解;纤维素酶
中图分类号：R284文献标识码：A
文章编号：1673-7717(2012)04-0718-03
Study on Process Conditions in Hydrolysis of Geniposide with Cellulase
KANG Ping,PU Yi-Qiong,ZHANG Tong,LU Yi, WU Tao
(Teaching Experimental Center,Shanghai University of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 201203,China)
Abstract:Objective:To study the process conditions of the hydrolysis of geniposide with cellulase.Method:One-factor experimental design was used to investigate the effects of reaction temperature, reaction time, and reaction pH in the hydrolysis of geniposide by cellulase, and to find out the optimized condition of hydrolysis with cellulase. Results:The optimized condition of hydrolysis with cellulase was as follows: reaction temperature was 50℃, one-factor experimental design and reaction pH was 5.1.Conclusion:The process conditions in hydrolysis of geniposide with cellulase were reasonable and feasible, so the purity of genipin was high.
Key words:geniposide;genipin;hydrolysis;cellulase
栀子为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis 的干燥成熟果实，《中华本草》记载其苦味，性寒；归心、肝、肺、胃、三焦经；主治热病心烦，肝火目赤、头痛，湿热黄疸等症。临床上有报道用单味栀子水煎口服治疗急性黄疸型肝炎，治愈率接近90%[1]。
中药栀子果实中的有效成份主要为环烯醚萜苷类化合物，其主要为栀子苷(geniposide)、栀子苷酸(geniposidic acid)、羟异栀子苷(gardenoside)、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷(genipin-1-β-D-gentiobioside)，另外还含有藏红花酸(crocetin)、藏红花素(crocin)等成分，在体内起到利胆保肝的药理作用[2-3]。研究表明，栀子苷在肠道内活性酶的作用下脱去糖基代谢为栀子苷元(genipin)后产生利胆作用[4]。栀子苷口服给药有肠内致泻的不良反应(栀子苷的导泻作用ED50为300mg/kg，服药3h起作用)。本试验采用酶水解的方法将栀子苷转化成栀子苷元，缓解了肠内致泻的不良反应，具有较好的临床使用前景。
1 仪器与材料
栀子苷对照品(中国药品生物制品检验所，供含量测定，批号0749-200007)；栀子苷(自制，纯度HPLC>90%)；栀子苷元(CHALLENGE BIOPRODUCTS CO,LTD，纯度HPLC>98%)；纤维素酶(郑州市海洋科技实业有限公司)；硅胶板(GF254)(烟台汇友硅胶开发有限公司)；无水乙醚,甲醇等其他试剂均为AR级(国药集团试剂总公司)。
旋转蒸发器(SENCO W201型，上海申生科技有限公司)；电子分析天平(Sartorins BS110S，北京赛多利斯天平有限公司)；真空干燥箱(DZF系列，上海华连医疗器械有限公司)；真空泵(SHB-ШS，郑州长城科工贸有限公司)；电热恒温水汽锅(HHS型，上海博医实业有限公司医疗设备厂出品)；多头磁力加热搅拌器(HT-4A，常州国华电器有限公司)；高效液相色谱议(agilent1100，AGILENT公司)。
2方法与结果
2.1酶水解制备栀子苷元的单因素考察
2.1.1温度对酶水解的影响
精密称取栀子苷约0.5g，纤维素酶1g各6份，于圆底烧瓶中，加入50mL pH值为5.1的缓冲溶液，分别于25、30、37、45、50、55、65℃的不同温度下 ......
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