高效液相色谱法测定锦灯笼药材中维生素C含量
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摘 要：目的：建立一种测定锦灯笼药材中维生素C含量的方法。方法：色谱柱采用Agilent TC-18 (4.6mm×150mm，5μm)，柱温为25 ℃，以0.1%草酸水为流动相，流速为0.5 mL·min-1，UV检测器，检测波长为265nm。结果：样品进样量在4.72～23.6μg时呈良好的线性关系(r=0.9997)；加样回收率分别为99%和97%，RSD为2.52%和2.12%。结论：本法操作简便，分离效果好。
关键词：HPLC；锦灯笼；维生素C
中图分类号：R284文献标识码：A
文章编号：1673-7717(2012)04-0877-02
HPLC Determination of Vitamin C of Physalis Calyx Seu Fructus
XU Bao-li,GUAN Hui-jie, WANG Bing
(Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian116600，Liaoning，China)
Abstract: Objective：To establish a HPLC method for determining Vitamin C of Physalis Calyx Seu Fructus.Method：HPLC analysis was performed on a Agilent TC-18 analytical column (150mm×4.6mm，5μm)using 0.1% aqueous oxalic acid as the mobile phase with UV absorption 265 nm. The flow rate was 0.5mL·min-1. Results：The calibration curves were linear for Vitamin C within 4.72~23.6μg(r=0.9997). The recoveries were 99% and 97% (RSD=2.52% and 2.12%).Conclusion：This method was simple and the results were satisfactory.
Key words:HPLC；Physalis Calyx Seu Fructus；Vitamin C
锦灯笼为茄科植物酸浆Plysalis alkekengi L.var.franchetii(Mast.) Makino的干燥宿萼或带果实的宿萼。秋季果实成熟、宿萼呈红色或橙红色时采收，干燥。本品清热解毒，利咽化痰，利尿通淋。用于咽痛音哑，痰热咳嗽，小便不利，热淋涩痛；外治天疱疮，湿疹[1]。近代药理研究表明锦灯笼还具有降低血糖和血脂以及抗癌等作用[2]。
维生素C又名抗坏血酸，参与氨基酸代谢、神经递质的合成、胶原蛋白和组织细胞间质的合成，可降低毛细血管的通透性，加速血液的凝固，刺激凝血功能，促进铁在肠内吸收，促使血脂下降，增加对感染的抵抗力，参与解毒功能，且有抗组胺的作用及阻止致癌物质(亚硝胺)生成的作用，其临床用途广泛[3]。
锦灯笼不仅可以作为药用，在民间也被作为水果使用，因此对锦灯笼的宿萼和果实中的维生素C含量进行检测，不仅具有药用价值，而且对其以后的保健品开发方面也提供了依据。
维生素C含量测定的方法如滴定法、分光光度法、荧光法、电极法、薄层色谱法和高效液相色谱法等，总之测定方法有很多，但高效液相色谱法是目前发展较为迅速的一种方法[4]。本实验采用高效液相色谱法，希望见建立一个简便、快捷、准确的锦灯笼药材中维生素C的含量的检测方法。
1 仪器、试剂与试药
1.1 仪器
电子分析天平(上海精密科学仪器有限公司)；KQ-3000型超声波清洗器(江苏昆山超声仪器有限公司)；Agilent 1100高效液相色谱仪；紫外检测器。
1.2 试剂
草酸、磷酸二氢钾、醋酸、磷酸二氢钠，所用试剂均为分析纯；磷酸、甲醇、乙腈，所用试剂均为色谱纯；超纯水。
1.3 试药与药材
维生素C购于上海源叶生物科技有限公司，批号：YY20110210，纯度≥98%。
锦灯笼药材的萼片与果实采自辽宁省沈阳市白清寨地区为野生品种，经辽宁中医药大学药用植物教研室王冰教授鉴定为茄科酸浆属植物酸浆。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Agilent TC-18 (4.6×150mm，5μm)；柱温：25℃；流动相：0.1%草酸；流速：0.5mL·min-1。检测波长为265nm。
2.2 对照品溶液制备
精密称取对照品适量，加0.1%草酸制成1mL含维生素C 1.18mg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液制备
称取锦灯笼宿萼和果实干燥粉末1g，精密称定，至于具塞锥形瓶中，加1%草酸30mL超声提取1h，布氏漏斗抽滤，滤液转移至50mL容量瓶中，用1%草酸定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)过滤，取续滤液，即得。
A：宿萼样品图；B：果实样品图；C：维生素C对照品图
图1 锦灯笼药材维生素C高效液相色谱图
2.4 线性关系考察
精密吸取维生素C对照品溶液4、8、12、16、20μL，分别注入液相色谱仪测定，以对照品进样量为横坐标(X)，对照品锋面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，得回归方程：y=265.32x-12.47，r=0.9997。结果表明：维生素C对照品在4.72~23.6μg范围内，锋面积与进样量有良好的线性关系。
2.5 精密度试验
精密吸取同一供试品溶液20μL，重复进样5次，测定色谱峰面积，RSD为1.23%。
2.6 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液20μL，每0，2，4，6，8 h测定1次，结果显示8h内，溶液中维生素C锋面积稳定，RSD为0.87%。
2.7 重复性试验
取同一批样品，称取5份，按供试品溶液制备项下方法制备，结果宿萼样品中维生素C的平均含量为0.25mg·g-1，果实样品中维生素C平均含量为1.91mg·g-1 ，RSD分别为1.85%和0.45%，重复性好。
2.8 加样回收率试验
取已知含量的锦灯笼宿萼和果实干燥粉末各5份，每份1g，精密称定，分别加入对照品溶液1mL，按上述方法测定，计算回收率，回收率在97%~103%和96%~100%之间，RSD为2.52%和2.12%，结果见表1～2。
取同一产地的3批药材按上述方法对锦灯笼宿萼和果实进行维生素C的含量测定，结果见表3。
3 讨 论
(1)本文采用多种流动相进行试验，分别用不同浓度、不同PH值的草酸[5] ......
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