酶联免疫吸附检测进展(1)
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文章编号：1009-5519(2007)13-1963-02中图分类号：R446文献标识码：A
酶联免疫吸附测定 (enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)技术是1971年由Engvall 和Perlman 建立的一种生物活性物质微量测定新技术,以其灵敏度高、特异性好等优点,在生命科学各领域得到广泛应用。近年来，该技术不断改进，形成了多种分析方法，并且在检测的灵敏度、特异性、操作简单化、高效性等方面都有很大提高。ELISA法一方面是建立在抗原与抗体免疫学反应的基础上，因而，具有特异性。而另一方面又由于酶标记抗原或抗体是酶分子与抗原或抗体分子的结合物，它可以催化底物分子发生反应，产生放大作用，正因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性[1]。因此，ELISA法是一种既敏感又特异的方法。有报道441例梅毒患者的血清样品，认为ELISA的敏感性和特异性为100%和93%[2]。本文将ELISA的基本原理、类型、关键技术环节、国内外近年来ELISA的新技术综术如下：
1ELISA的建立
1.1抗体的制备：任何一种ELISA方法都需要抗体，因此在建立ELISA方法时都需要制备满足实验方法的抗体，抗体的制备是利用动物对外来异己的物质(抗原)的排斥作用发生免疫反应，在体液(血液)中产生针对该异己物质的免疫球蛋白，成为抗体，提取这些动物的体液就可以得到相应的抗体。抗原的种类很多，大小也不同，不同的抗原免疫动物具有不同的特殊性，一般情况当抗原的分子量较大时(大于5000D)才能诱导动物产生抗体，免疫动物时需用佐剂，如小分子激素或基因工程抗原等半抗原物质需先通过人工的方法与蛋白质载体连接后再与佐剂混合免役动物，方可获得理想的免疫效果，一些药物和激素的抗体都需经这个方法制得[3]。抗体的纯化方法有：中性盐沉淀、离子交换层析和亲和层析等方法。制备的抗体一般需要进行特异性和亲和力的鉴定。
近年来，随着单克隆抗体技术的发展，在ELISA方法中越来越多的应用单克隆抗体。单克隆抗体是由B细胞杂交瘤细胞株产生的，只针对一种抗原决定簇的单一抗体。是将小鼠骨髓瘤细胞和小鼠脾细胞融合成杂交瘤细胞，这种细胞能在人工培养下无限增殖，又能产生特异性抗体[4] ......
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