慢性乙型肝炎患者血清TGF-β、MMP-1、TIMP-1水平及其与肝纤维化程度的研究(2)
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1.2 观察指标：TGF-β、TIMP1、MMP1试剂盒购自美国sigma生物技术工程公司，Ⅲ型前胶原N端肽(PⅢP) 和Ⅳ型胶原(Ⅳ C)试剂盒购自深圳晶美生物公司，透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)试剂盒购自上海海军医学研究所。除PⅢP采用放射免疫分析法检测外，其他均采用酶联免疫吸附分析法检测。
1.3 病理组织观察：标本经甲醛固定，行HE、网织加Masson、苦味酸天狼猩红染色，经3位有经验的医师盲法进行分级、分期及计分的判定。炎症活动度分级及纤维化分期依照2000年病毒性肝炎防治方案中的病理组织学诊断标准进行[4]。根据王泰龄等修订的慢性肝炎炎症活动度及纤维化程度半定量计分方案进行纤维化程度半定量计分。应用HPIAS-l000高清晰度彩色病理图文报告分析系统对网织加Masson染色肝组织进行图像分析。10×20倍数观察，选取每1例标本5个不同的视野下相同大小的区域，测算出胶原面积占该区域面积的百分比，取平均值作为胶原的相对含量值。
1.4 统计学分析：应用SAS8.2统计软件处理数据，进行t检验和相关分析。
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2 结果
2.1 随纤维化分级加重，血清TGF-β、MMP-1、TIMP-1、TIMP-1/MMP-1和血清PⅢP、ⅣC、HA、LN等纤维化指标、纤维化半定量计分、胶原含量升高，纤维化分级不同(S0级与S2级比较、S1级与S3级比较、S4级与S2级比较)血清TGF-β、TIMP-1、TIMP-1/MMP-1和血清纤维化指标、纤维化半定量计分、胶原含量差异显著(P0.05)。见表1。
2.2 血清TGF-β(r=0.745，P
2.3 前后两次比较肝纤维化分级加重患者血清TGF、TIMP-1、MMP/TIMP-1增加显著(P
3 讨论
对肝纤维化程度及其进展速度的判断是对慢性乙型肝炎诊断和疗效检测的关键环节，目前临床多采用肝穿刺活组织检查。肝刺穿活组织检查为有创的检查手段，常不能被患者接受。能快速有效反应肝纤维化程度的血清指标是医学界长期寻找的目标。PⅢP、IV型胶原、HA、LN等是当今研究最多的肝纤维化血清学指标，动物实验与临床研究均表明它们与肝脏组织纤维化程度有良好的相关性，可反映肝脏纤维组织增生程度[5]。本研究中随肝纤维化分级的加重血清PⅢP、IV型胶原、HA、LN与纤维化逐渐增加，再次证实了这些指标与纤维化程度的相关性，可用于临床对肝纤维化程度进行判断。
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慢性乙型肝炎时，乙肝病毒损伤肝组织，导致以胶原为主的细胞外间质合成增多和降解减少，从而引起细胞基质和胶原积聚，最终形成肝纤维化。TGF-β是促进胶原和细胞外基质合成的重要炎症介质，是目前普遍认为的炎症反应导致组织纤维组织增生的最重要的细胞因子。已有研究证实肝组织中TGF-β增加是慢性乙型肝炎时肝纤维化形成的重要病理生理基础，本研究中慢性乙型肝炎患者，随着纤维化分级加重血清TGF-β增加，血清TGF-β水平与肝纤维化程度、计分、肝组织胶原含量及血清纤维化指标成显著正相关，同时肝纤维化有显著进展的慢性乙型肝炎患者血清TGF-β水平较高，且升高显著，均表明血清TGF-β水平可反映肝纤维化的程度和发展速度。肝纤维化过程同时包括胶原和细胞外基质降解异常。MMPs/TIMPs共同构成体内调节细胞外基质降解动态平衡的最重要的系统， TIMP-1和MMP-1是该系统主要组成部分，在肝脏等脏器中细胞外间质改建过程中发挥重要作用。现已证实TIMP-1增加和(或)MMP-1减少可使细胞间质降解减少，特别是胶原降解减慢，导致组织纤维化发生；反之，导致组织细胞外间质发生破坏性重建。慢性乙型肝炎时肝脏TIMP-1和MMP-1表达增多，但TIMP-1与MMP-1比值升高，这种改变导致细胞外间质降解减慢，从而参与肝纤维化的发生、发展过程。已有实验证实肝组织中MMPs/TIMPs系统失衡是乙肝病毒导致肝纤维化的重要因素，本研究中慢性乙型肝炎患者，随着纤维化分级加重血清TGF-β增加，血清TIMP-1及TIMP-1与MMP-1比值增加，TIMP-1及TIMP-1与MMP-1比值与肝纤维化程度、计分、肝组织胶原含量及血清纤维化指标成显著正相关，同时肝纤维化有显著进展的慢性乙型肝炎患者血清TIMP-1及TIMP-1与MMP-1比值水平较高，且升高显著，均表明血清TIMP-1及TIMP-1与MMP-1比值水平可反映肝纤维化的程度和发展速度。本研究中慢性乙型肝炎患者血清TIMP-1、MMP-1及TIMP-1与MMP-1比值与纤维化的分期及计分相关性显著，表明血清TIMP-1、MMP-1及TIMP-1与MMP-1比值可反应肝纤维化程度。最近的研究表明，TGF-β不仅可导致胶原等细胞外间质成分生成增多，也可通过促进TIMPs表达和抑制MMPs表达及活性，阻止细胞间质的降解，本研究中TGF-β与TIMP-1及TIMP-1与MMP-1比值呈正相关，与MMP-1负相关，可提示TIMP-1、MMP-1改变可能与TGF-β变化有关。
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本研究结果显示乙型肝炎时血清TGF-β同TIMP-1、MMP-1及TIMP-1与MMP-1比值均可与肝纤维化程度关系密切，可从细胞外间质合成和降解两方面反应肝纤维化程度，为寻找临床肝纤维化判断指标提供新实验佐证和新的方向。
参考文献：
[1] 朱跃科，王宝恩，申凤俊，等.肝纤维化过程中胶原、基质金属蛋白酶及其抑制因子表达的动态变化及相互关系[J].中华肝病杂志，2004，10：612.
[2] 李蕴洳，魏 来.转化生长因子β/Smad信号传导机制及其与肝纤维化的关系[J]. 中华肝脏病杂志，2005.6476.
[3] 中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会病.病毒性肝炎防治方案[J].中华肝脏病杂志，2000，8：324.
[4] 王泰龄，刘 霞，周元平，等. 慢性肝炎炎症活动度及纤维化程度计分方案[J].中华肝脏病杂志，1998，6：195.
[5] 胡义扬，刘 平，刘 成，等.基于肝组织病理动态变化情况探讨血清学指标在肝纤维化诊断中的意义[J].中华肝脏病杂志，2006，3：174.
收稿日期：2007-10-17, 百拇医药(寇国先 刘 冰 龙 波 许 斌)