文章编号：1009-5519(2008)13-1994-02 中图分类号：R28 文献标识码：A

    拉米夫定等核苷(酸)类似物长期治疗最重要的问题是基因突变导致耐药的产生。现就拉米夫定基因耐药检测方法及临床进展作一综述。

    1 基因耐药检测方法

    基因耐药是指乙肝病毒基因发生特定的突变，并在体外实验中证实与耐药有直接关系。HBV复制过程中一个显著特点是以RNA为中间体进行逆转录，这一个过程因其DNA多聚酶缺乏校对功能而易发生变异，其变异发生率比一般DNA病毒大约10，000倍，各种类型变异均可发生，各编码区亦均可发生变异，P区编码HBV DNA聚合酶，为拉米夫定作用靶点，其突变导致耐药的发生。常用的检测方法如下。

    1.1 核苷酸序列测定：将PCR扩增与核酸序列分析技术结合，直接测定HBV DNA聚合酶基因序列，可以检测出多位点的变异，称为PCR-序列分析，简称直接测序。是分析病毒基因的金标准，其主要优点是可检测出新的变异株，这对服用过抗病毒药物治疗的患者检测出未知的耐药突变株特别重要。其不足之处在于很难检测突变株与野生株混合感染(突变病毒占30%仍较难检测)[1]。另外操作费时，费力，检测成本高，及检测结果分析技术难度较大等限制了其在大规模标本临床检测中的应用。现代DNA测序大都应用循环测序的技术，采用新型的超纯热稳定多聚酶 ......