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编号:11716945
正交实验法优选复方蚕蛹胶囊的提取工艺研究
http://www.100md.com 2008年12月15日 《现代医药卫生》 2008年第24期
正交实验法优选复方蚕蛹胶囊的提取工艺研究
正交实验法优选复方蚕蛹胶囊的提取工艺研究
正交实验法优选复方蚕蛹胶囊的提取工艺研究
正交实验法优选复方蚕蛹胶囊的提取工艺研究

     【摘要】目的:优选复方蚕蛹胶囊的醇提工艺。方法:采用 L9(34)正交试验 ,以人参皂苷Rg1和浸膏得率为指标,考察乙醇浓度、加醇量、回流时间对提取效果的影响。结果:最佳工艺为:药材加70%乙醇回流提取2次,第一次用8倍量的乙醇,回流2小时;第二次用7倍量的乙醇,回流1小时。结论:本研究为复方蚕蛹胶囊的醇提工艺的确定提供实验依据。

    【关键词】复方蚕蛹胶囊;正交试验;提取工艺

    文章编号:1009-5519(2008)24-3645-02 中图分类号:R28 文献标识码:A

    复方蚕蛹胶囊主要由蚕蛹、三七、丹参等中药提取制备而成,用于治疗肝纤维化、痰瘀互结证。本文采用HPLC法测定,以人参皂苷Rg1[1,2]的提取率和浸膏得率为指标综合评价,用正交实验法对复方蚕蛹胶囊的提取工艺进行了优选。

    1 仪器与试药
, 百拇医药
    1.1 仪器:岛津LC-10ADVP高效液相色谱仪,SPD-10AVP紫外检测器,HW色谱工作站;Libror AEL-40SM电子天平(Shimadzu公司);ZF-6050型真空干燥箱(上海精宏实验仪器有限公司)。

    1.2 试药:蚕蛹、三七、丹参等药材均购自安徽省亳州市中药饮片厂;人参皂苷Rg1对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号:110703-200424);甲醇、乙腈为色谱纯;其它试剂均为分析纯;水为二次重蒸馏水。

    2 方法与结果

    根据处方中药材中有效成分的性质特点,复方蚕蛹胶囊的提取工艺路线初步定为,用较高浓度的乙醇回流提取2次,将两次提取的回流液合并,减压回收乙醇,浓缩得浸膏, 待用。

    2.1 复方蚕蛹胶囊的醇提工艺优选

, 百拇医药     2.1.1 因素水平的选择:乙醇回流提取的主要影响因素为乙醇浓度,加醇量,提取次数和提取时间,经预试验确定次数为2次,现按三因素三水平选L9(34)表安排正交实验,各因素水平见表1。

    2.1.2 样品制备

    2.1.2.1 正交实验含量测定样品的制备:按处方比例称取2倍处方量的药材,按照正交实验表顺序回流提取,提取液滤过,滤液减压回收乙醇后,用水定容至500 ml,从中量取25 ml,用乙醚洗涤2次,每次20 ml;用水饱和的正丁醇萃取2次,每次30 ml,萃取液先以1%碳酸氢钠溶液50 ml洗涤,再以50 ml正丁醇饱和的水洗涤,最后将正丁醇液水浴蒸干,用甲醇定容至50 ml,过0.45 μm微孔滤膜,即得。

    2.1.2.2 人参皂苷Rg1对照品的制备:取105 ℃干燥恒重的人参皂苷Rg1适量,精密称定,置于10 ml容量瓶中,用甲醇定容至刻度,摇匀,配成浓度为0.5 mg/ml的溶液。
, 百拇医药
    2.1.3 浸膏得率测定:按照2.1.2.1中方法从500 ml中量取25 ml,水浴挥干,置烘箱中105 ℃烘干5 h,置干燥器中冷却20 min,称重,恒重后计算浸膏得率。

    2.1.4 含量测定:色谱条件:样品中人参皂苷Rg1采用HPLC法进行测定,选用Hypersil ODS2柱(250×4.6 mm,5 ?滋m);流动相为乙腈∶水=25∶75;检测波长203 nm;流速1 ml/min;柱温为25 ℃;进样量10 μl。测定结果见表2,方差分析见表3。

    2.1.5 结果分析:由表3方差分析结果可以看出,A因素即醇浓度对实验结果影响显著,B和C均不显著,各因素的主次顺序为A、C、B,即醇浓度、提取时间、加醇量。从直观分析表中可知最佳工艺为A1B3C3,考虑到实际生产和经济效益,确定最佳工艺为A1B2C3,即:用70%乙醇回流提取2次,第一次加8倍量乙醇,回流提取2 h,第二次加7倍量乙醇,回流提取1 h。
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    3 最佳工艺验证试验

    最佳工艺放大验证:取10倍处方量的药材,用70%乙醇提取2次,第一次加8倍量乙醇,回流提取2 h,第二次加7倍量乙醇,回流提取1 h,结果人参皂苷Rg1提取率和浸膏得率均处于较高水平,说明该提取工艺合理、稳定、可行,结果见表4。

    验证实验表明,正交优选方案提取的结果与正交试验结果接近,能符合制剂要求。

    4 讨论

    4.1 根据有关的文献资料,三七中的人参皂苷Rg1等有效成分都属于四环三萜类皂苷都需要用较高浓度的乙醇提取,进行了正交实验的考察优选后,将最终的工艺确定为用70%乙醇提取两次,第一次加8倍量乙醇,提取2 h,第二次加7倍量65%乙醇,提取1 h。通过验证实验证明工艺稳定可行(见图1)。

    4.2 实验中用HPLC测定人参皂苷Rg1的含量时,采用乙腈∶水=25∶75作为流动相, 分离效果要比甲醇-水的分离效果好,人参皂苷Rg1能达到基线分离(见图2)。进样前,样品需经过纯化富集人参皂苷Rg1后才能达到基线分离,仅仅用乙醚洗涤效果不理想,需要用水饱和的正丁醇进行多次萃取,这样处理后的样品峰基本无干扰。

    参考文献:

    [1] 石小枫,徐 曼,刘 杞.三七总皂甙对肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1的影响[J].中药药理与临床,2001,17(2):7.

    [2] 蔡燕玲,黎罕文,杨晓明.三七的药理研究进展[J].陕西中医学院学报,2001,24(5):57.

    收稿日期:2008-08-05, 百拇医药(张先洪 胡 芳 张兴德 程建明)