李青岭，吴建勇，赵德璋(重庆医科大学生命科学研究院，重庆400016)

    舌鳞癌的治疗多以手术切除为主，但可导致患者面部畸形和功能障碍，影响患者的生活质量。因此，寻找新型、高效、低毒的化疗药物对舌鳞癌的综合治疗具有重要意义。熊果酸是广泛存在于天然植物中的一种三萜类化合物，具有抗炎、抗氧化、降血脂等多种药理学效应。近年来发现，熊果酸还可抑制多种肿瘤细胞的增殖、迁移并诱导凋亡[1-5]。为探讨该成分对舌鳞癌细胞的增殖及凋亡的作用，本研究以舌鳞癌细胞株Tca8113为研究对象，观察不同浓度熊果酸对Tca8113细胞的增殖、凋亡的作用及其可能机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 Tca8113细胞由四川大学华西口腔医院惠赠。熊果酸(南京替斯艾么中药研究所，批号：TCM-036，纯度98%)，用二甲基亚砜(DMSO)配成1 mmol/L的贮存液；RPMI-1640培养基和胎牛血清购自美国Gibco公司；Hoechst333258检测试剂盒购自南京凯基生物技术公司；AnnexinⅤ-异硫氰酸荧光素(AnnexinⅤ-FITC)检测试剂盒购自美国BIPEC生物试剂公司；Rhodamine123和caspase 3活性检测试剂盒购自北京碧云天生物技术公司；iQ SYBR Green supermix购自美国Bio-Rad公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养与细胞分组 细胞接种于RPMI-1640培养液(含10%胎牛血清及青霉素、链霉素各100 U/mL)，置于37℃、5%CO2饱和湿度的孵箱中培养。传代至细胞状态稳定后，将细胞按要求分组如下：阴性对照组，熊果酸低、中、高剂量处理组(10、20、40 μmol/L)。将上述细胞培养24 h后，按分组要求加入不同剂量的熊果酸作用24 h后，测定各项试验指标。

    1.2.2 MTT法检测细胞增殖活性 取对数生长期细胞，调整细胞浓度为每毫升4×104个，接种于96孔板中，每孔150 μL。培养24 h后按分组要求加入不同剂量的熊果酸，溶剂对照组加等体积的DMSO，每组设5个复孔。培养 24 h 后，每孔加入 MTT 溶液(5 mg/mL)20 μL，继续培养4 h。终止培养，小心吸弃孔内培养上清液。每孔加入150 μL DMSO，振荡，使结晶充分溶解，采用酶标仪测定492nm处各孔吸光度(A)值。存活率=A药物组/A对照组×100%。

    1.2.3 荧光染色法观察细胞DNA损伤 根据Hoechst 333258染色试剂盒说明书操作。取对数生长期细胞接种于24孔培养板 ......