张 弦，蒋道荣，张海峰，朱雪娟，张 彬

    (南通大学附属医院感染性疾病科，江苏 南通 226001)

    细胞凋亡是急性肝衰竭时肝细胞死亡的主要形式之一[1-2]。细胞凋亡信号传导途径是调控细胞凋亡的关键。迄今为止，对急性肝衰竭时肝细胞发生大量凋亡的信号传导机制尚缺乏充分的认识。

    细胞Toll样受体4(TLR4)主要识别革兰阴性菌胞壁成分脂多糖(LPS)。正常肝细胞膜表达TLR4，在急性肝衰竭小鼠肝细胞膜TLR4的表达明显升高[3]。与细胞凋亡有关的信号传导通路中磷酸肌醇-3激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)通路是重要的介导细胞存活的信号通路，可通过介导多种生物学效应而发挥抗凋亡作用[4]。AKT激活后主要通过促进糖原合酶激酶3β(GSK3β)等下游底物的磷酸化而发挥广泛的生物学效应[5]。TLR4介导的PI3K/AKT/GSK3β信号通路参与了肝细胞凋亡过程。本研究采用LPS作为TLR4的配体，体外刺激大鼠肝BRL-3A细胞制备肝细胞凋亡模型，探讨了苦参素(OMT)联合复方茵陈颗粒(FYK)是否可通过TLR4介导的 PI3K/AKT/GSK3β 信号通路抑制大鼠肝BRL-3A细胞凋亡，旨在为TLR4介导的信号通路在急性肝衰竭时肝细胞凋亡方面的作用提供更多的理论依据。

    1 材料与方法

    1.1材料

    1.1.1细胞 大鼠肝BRL-3A 细胞株由中科院细胞库(上海)提供。

    1.1.2试剂 LPS 购自Sigma公司。OMT(纯度大于 98%)购自陕西宝鸡市方晟生物开发有限公司。FYK 3个组分(茵陈、丹参、大黄)颗粒剂购自江阴天江药业有限公司。TLR4抗体购自美国NOVUS公司。AKT、P-AKTSer473、GSK3β、P-GSK3βSer9、Bax、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及活性-半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)抗体均购自美国Abcam公司 ......