周 荧，陈雨湉，赖世云，胡 蓓，任一平，*

    (1 浙江工业大学 杭州310000 2 杭州帕匹德科技有限公司 杭州310000)

    牛血清白蛋白(Bovine serum albumin，BSA)由582 个氨基酸残基组成，分子质量约66.4 ku，含有2 个变异体，两者之间只存在1 个氨基酸的差异，B 型中第214 位的氨基酸由丙氨酸(Ala)突变为苏氨酸(Thr)。BSA 广泛应用于生化试验中，一般作为稳定剂被用于限制酶或者修饰酶的保存溶液和反应液中[1]。乳汁中的BSA 与血液中的血清白蛋白物理化学特性相同，在常乳中含量约为0.4 g/L[2-4]。BSA 是人体必需氨基酸的良好来源，也是生物活性肽的重要来源，具有结合游离脂肪酸和其它脂类的作用，还具有抑制脂质氧化的作用[5-7]。

    目前，BSA 的定量检测方法以荧光光谱法[8-10]和免疫学方法[11-13]为主。纪圆圆等[14]研究确定了BSA 浓度与ZnS 量子点荧光强度之间的线性关系，实现BSA 含量的检测。荧光光谱法检测速度快，操作简单，然而不适用于基质复杂的样品，其它蛋白会干扰检测结果。王玮等[15]利用鼠抗BSA单克隆抗体，使用表面等离子共振技术定量检测牛肉制品中的BSA。袁耀武等[16]建立了1 个竞争酶联免疫吸附法，用于牛乳中BSA 的检测。免疫学方法一般具有特异性强，灵敏度高的优点，较适用于微量非变性蛋白质的定量检测，然而用于乳制品的检测时，由于食品加工会导致蛋白质发生各种修饰，如磷酸化和糖基化，造成假阴性的结果。

    靶向蛋白质组学(Targeted proteomics)技术是对目标蛋白质进行精确定量的检测技术。将蛋白质酶解成肽段，经色谱分离，使用三重四极杆中选择反应监测(SRM)或多反应监测模式(MRM)，建立相应的定量检测方法[17-19]。靶向蛋白质组学实现了对特征肽段的准确定量，并根据肽段与蛋白质之间的量子传递关系，实现对目标蛋白质的准确定量。靶向蛋白质组学技术的主要步骤如下：1)目标蛋白质特征肽段的筛选。该步骤是影响定量方法准确性的关键步骤，所选特征肽段应具有特异性强，灵敏度高，稳定性好等特点。2)同位素内标的设计。加入同位素内标能有效校正离子化过程中复杂基质的基质效应问题。3)质谱方法的建立。

    本研究使用三重四极杆中MRM 模式建立乳制品中BSA 的定量检测方法，该方法具有灵敏度高，特异性强等特点，可满足市售婴幼儿配方奶粉与乳清粉中BSA 含量的测定。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂 ......