童文烽，杨国良，叶文慧，赖世云，任一平*，李 铎*

    (1浙江大学生物系统工程与食品科学学院 杭州 310058 2浙江清华长三角研究院 浙江嘉兴 314006 3内蒙古伊利实业集团股份有限公司 呼和浩特 010110)

    母乳是公认的新生儿的最佳营养来源，含有大量难以被消化的母乳低聚糖(Human milk oligosaccharides，HMOs)，它们是母乳中仅次于乳糖和脂肪的第三大组分[1]，在成熟乳中含量为5～15 g/L，在初乳中含量为20～25 g/L[2-5]。HMOs 由葡萄糖、半乳糖、N-乙酰氨基葡萄糖、岩藻糖和N-乙酰神经氨酸5 个单糖单元组成，其通常包含还原末端的乳糖核心(Galβ1-4Glc)，通过几种糖基转移酶的作用与其余3 个单糖单元一起延长，其单糖组成数量一般为3～14 个。根据HMOs 是否被唾液酸化，HMOs 被分类为酸性或中性[6]。虽然HMOs难以被婴儿消化吸收，但是它在婴儿健康成长中仍起着重要作用。大量研究表明，HMOs 与大脑成熟[7-9]，免疫调节[10-11]，肠道菌群调节[12-13]有关，并且这些HMOs 的许多生物学功能与结构有关。例如，3’-唾液酸乳糖(3’-SL)通过选择性肠道细菌定植影响小鼠结肠炎，而其异构体6’-SL 不具有这种生物功能[14]。因HMOs 的一些生理功能，而受到越来越多的关注，有2 种HMO 已在美国与欧洲被正式批准作为新食品成分使用[15]。添加HMO 的婴配粉产品也随之出现。深入了解HMOs 的组成、功能以及生理活性，对于开发更为接近母乳的婴幼儿配方奶粉至关重要。为此，研究HMOs 准确的检测方法至关重要。

    母乳组成复杂，含有大量的乳糖与乳脂肪，给HMOs 的分离检测带来较大挑战。HMOs 本身无发色基团，在检测器上的灵敏度低，需进行衍生反应，如发色活性标记物标记，常用的标记物有2-氨基苯甲酸(2-AA)、2-氨基苯甲酰胺(2-AB)[16]和2-氨基吖啶酮(AMAC)[17]等。目前，针对母乳低聚糖的分离方法主要有高效阴离子交换色谱(HPAEC)[18-19]、多孔石墨化碳色谱(PGC)[20-22]、毛细管电泳(CE)[23-24]和高效液相色谱(HPLC)[5，25-26]，再辅以安培脉冲(PAD)、紫外(UV)、荧光检测器(FLD)或质谱(MS)来达到将HMOs 分离检测的目的。高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS)相比荧光等检测手段灵敏度更高，分离选择性更好[27]，被广泛应用于HMOs 的定性与定量分析中。本研究基于衍生反应，针对母乳基质建立6 种母乳低聚糖的高效液相色谱-串联质谱的同步定量检测方法 ......