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编号:13009358
维甲酸对脑出血大鼠LINGO—1表达的影响(2)
http://www.100md.com 2017年2月1日 《心脑血管病防治》 2017年第1期
     1.3 LINGO-1 mRNA检测: 采用RT-PCR法检测:脑组织取自出血灶周,所得RNA用紫外线分光光度计定量测量RNA浓度。逆转录合成cDNA:反应体积10μl,37 ℃孵育15 min,85 ℃,5 s 终止反应,灭活反转录酶。引物序列如下:LINGO-1 引物序列为上游5-GCCACCTGGTCTATCT CCGTTTC-3’,下游5-GCAGGTAATTGAGCCCACGAAA G-3’(162 bp)。内参ACTIN 上游5’-CG TTGACATCCGTAAAGACCTC-3’,下游5’-TAGGAGC CAGGGCAGTAATCT -3’(110 bp),均由武汉谷歌生物有限公司设计合成。反应条件:94 ℃预变性3 min,进入循环94 ℃变性30s,58 ℃退火30s,72 ℃延伸30s,35 个循环,最后72 ℃延伸5min。RT-PCR 产物在琼脂糖凝胶上进行电泳,电泳条带用美国Quantity-one凝胶图像处理系统分析,计算目的条带和内参照吸光度比值。

    1.4 LINGO-1蛋白检测:采用Western blot法检测 :出血灶周脑组织在PBS中匀浆,离心,加入裂解液后置于冰上不断搅拌 ......
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