阴道微生态失衡与高危型HPV感染及宫颈上皮内瘤变的研究(1)
【摘要】目的：探讨阴道微生态失衡与高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papilloma virus，HR-HPV)感染及宫颈上皮内瘤变(Cervical intraepithelial neoplasia，CIN)的关系，为宫颈癌的防治提供新的视角。方法：选取2016年06月-2017年06月在南京鼓楼医院妇科门诊就诊的有阴道微生态检测、HPV-HC2及随访结果的460例患者，其中162例为CIN合并有HR-HPV感染的患者(CIN合并HR-HPV感染組)，107例为单HR-HPV感染而无宫颈病变的患者(单HR-HPV感染组)，191例同期正常门诊体检的宫颈正常、HPV及宫颈细胞学均阴性的正常妇女(对照组)，269例HR-HPV感染患者中，依据HPV-HC2病毒载量进一步分为HPV-HC2>1组和HPV-HC2(1组，回顾性比较阴道微生态失衡与HR-HPV感染及CIN的关系。结果：(1)CIN合并HR-HPV感染组、单HR-HPV感染组及对照组患者的阴道微生态失衡率分别为54.9%、35.5%、和29.8%，CIN合并HR-HPV感染组的微生态失衡率明显高于单HR-HPV感染组及对照组(P<0.05)，单HR-HPV感染组的微生态失衡率与对照组相比，差异无统计学意义(P>0.05)。进一步分析，CIN合并HR-HPV感染组患者的阴道微生态指标Hz02 k PH数值均明显高于单HR-HPV感染组及对照组(P<0.05)，而单HR-HPV感染组的H202 & PH值与对照组相比，无明显统计学意义(P>0.05)；(2)根据HPV-HC2检测的HPV病毒载量，进一步分为HPV-HC2≥1组(205例)和HPV-HC2<1组(64例)，其阴道微生态失衡率为53.2%和29.8%，两组相比，差异有明显统计学意义(P<0.05)；对照组患者的阴道微生态失调率与HPV-HC2≥1组的患者相比，差异有明显统计学意义(P<0.05)，而与HPV-HC2<1组的患者相比，无统计学意义(P>0.05)。进一步研究，HPV-HC2>1组患者的H2O2及PH值均明显高于HPV-HC2<1组及对照组(P<0.05)：HPV-HC2(1组患者的H2O2及PH值与对照组相比，差异无统计学意义(P>0.05)。结论：当HR-HPV感染机体后，可能HR-HPV病毒高载量与阴道微生态失衡协同参与了CIN的发生，同时，HR-HPV病毒高载量可能与阴道微生态失衡有关，尤其与阴道乳杆菌异常及PH值改变密切相关。
【关键词】阴道微生态；高危型人乳头瘤病毒；宫颈上皮内瘤变；乳酸杆菌
宫颈癌是妇科常见恶性肿瘤之一，宫颈癌的发生发展受多种因素控制，HPV感染在宫颈癌发生发展过程中发挥重要作用[1-3]。高危型人乳头瘤病毒的持续感染是宫颈病变发生发展主要因素和必要条件[4]，但许多感染患者可自行转归[5]，最终不会导致宫颈病变，可能有其他因素参与了宫颈癌的发展[6]。病因学研究发现，CIN发生与阴道局部免疫功能下降有关，常合并阴道微生态异常降[7-8]。为分析阴道微生态失衡与HR-HPV感染及CIN的关系，寻找CIN的发生过程中协同HPV感染的其他因素，我们进行了一些研究，以期提供阻断宫颈病变的发生发展的新思路。
1 资料与方法
1.1 临床资料
根据患者妇科检查、宫颈TCT、HPV检测及宫颈活检等结果，选取2016年。月-2017年06月在鼓楼医院妇科门诊就诊的有阴道微生态检测、HPV HC2及随访结果的460例女性患者，其中，HR-HPV患者共269例，分为CIN合并HR-HPV感染组162例、单]IR-HPV感染组107例，对照组为191例同期正常门诊就诊的宫颈正常、HPV及TCT均阴性的患者。排除标准：年龄>65岁；妊娠哺乳期无性生活妇女；患有各种免疫性疾病、恶性肿瘤或使用免疫抑制剂等免疫功能低下者；2周内使用抗生素的患者。同时满足以下条件：48小时内无阴道冲洗；3天内无性生活及阴道放药史；一个月内未使用抗生素药物。
1.2 研究方法
1.2.1 阴道微生态检测
患者取膀胱截石位，常规消毒后，用窥阴器暴露阴道及宫颈，干棉签从阴道壁上1/3侧壁刮取分泌物，并在清洁载玻片上均匀涂抹；另取一根棉签于相同部位刮取分泌物，置入试管内。用江苏硕士生物科技公司提供的阴道联合检测试剂盒(过氧化氢(H2O2)，白细胞醋酶(LE)，唾液酸苷酶(SNA)，β-葡萄糖醛酸梅(GUS)，乙酞氨基葡萄糖糖苷酶(NAG)，PH值六联检测)，行白带功能学分析。联合6项指标并结合形态学检查，对阴道微生态进行评价。
1.2.2 HPV HC2检测
HPV HC2检测用采样刷在宫颈管内刷取标本，并用HPV HC2专用的保存液固定保存，使用美国凯杰公司第二代杂交捕获实验技术试剂盒检测，共检测13个印毛]}V基因型，包括HPV16，18，31， 33，35，39，45，51，52，56，58，59，66和68型，记录其具体载量。
1.3 诊断标准
1.3.1 阴道微生态检测结果判读标准
阴道微生态检测结果判读标准SNA不显色为正常，显红色或紫色为阳性；LE不显色代表正常，阳性为绿色或蓝色；H202>2mmol/L时颜色为红或紫，为阴性(-)，H2O2<2mmol/L为阳性(+)，颜色为蓝；NAG不显色表示阴性，显示淡黄色表示弱阳性，显示黄色表示阳性；PH值对照比色卡进行判读。用悬滴法将含有阴道分泌物的生理盐水悬滴于载玻片上，(X400倍)观察，看到滴虫为阳性，未见到为阴性；将阴道分泌物图片后革兰氏染色，在10X40倍显微镜下观察，观察阴道微生态菌种，看到抱子或假丝酵母菌为真菌阳性，否则阴性。正常微生态环境：NAG(-)；SNA(-)；LE(-)；GUS(-)；H2Oz(-)；PH值3.8-4.5；滴虫、假丝酵母菌均阴性。以上任何一项异常则为阴道微生态失衡。, 百拇医药(张莉 许继芹 王泓坛 洪颖)
【关键词】阴道微生态；高危型人乳头瘤病毒；宫颈上皮内瘤变；乳酸杆菌
宫颈癌是妇科常见恶性肿瘤之一，宫颈癌的发生发展受多种因素控制，HPV感染在宫颈癌发生发展过程中发挥重要作用[1-3]。高危型人乳头瘤病毒的持续感染是宫颈病变发生发展主要因素和必要条件[4]，但许多感染患者可自行转归[5]，最终不会导致宫颈病变，可能有其他因素参与了宫颈癌的发展[6]。病因学研究发现，CIN发生与阴道局部免疫功能下降有关，常合并阴道微生态异常降[7-8]。为分析阴道微生态失衡与HR-HPV感染及CIN的关系，寻找CIN的发生过程中协同HPV感染的其他因素，我们进行了一些研究，以期提供阻断宫颈病变的发生发展的新思路。
1 资料与方法
1.1 临床资料
根据患者妇科检查、宫颈TCT、HPV检测及宫颈活检等结果，选取2016年。月-2017年06月在鼓楼医院妇科门诊就诊的有阴道微生态检测、HPV HC2及随访结果的460例女性患者，其中，HR-HPV患者共269例，分为CIN合并HR-HPV感染组162例、单]IR-HPV感染组107例，对照组为191例同期正常门诊就诊的宫颈正常、HPV及TCT均阴性的患者。排除标准：年龄>65岁；妊娠哺乳期无性生活妇女；患有各种免疫性疾病、恶性肿瘤或使用免疫抑制剂等免疫功能低下者；2周内使用抗生素的患者。同时满足以下条件：48小时内无阴道冲洗；3天内无性生活及阴道放药史；一个月内未使用抗生素药物。
1.2 研究方法
1.2.1 阴道微生态检测
患者取膀胱截石位，常规消毒后，用窥阴器暴露阴道及宫颈，干棉签从阴道壁上1/3侧壁刮取分泌物，并在清洁载玻片上均匀涂抹；另取一根棉签于相同部位刮取分泌物，置入试管内。用江苏硕士生物科技公司提供的阴道联合检测试剂盒(过氧化氢(H2O2)，白细胞醋酶(LE)，唾液酸苷酶(SNA)，β-葡萄糖醛酸梅(GUS)，乙酞氨基葡萄糖糖苷酶(NAG)，PH值六联检测)，行白带功能学分析。联合6项指标并结合形态学检查，对阴道微生态进行评价。
1.2.2 HPV HC2检测
HPV HC2检测用采样刷在宫颈管内刷取标本，并用HPV HC2专用的保存液固定保存，使用美国凯杰公司第二代杂交捕获实验技术试剂盒检测，共检测13个印毛]}V基因型，包括HPV16，18，31， 33，35，39，45，51，52，56，58，59，66和68型，记录其具体载量。
1.3 诊断标准
1.3.1 阴道微生态检测结果判读标准
阴道微生态检测结果判读标准SNA不显色为正常，显红色或紫色为阳性；LE不显色代表正常，阳性为绿色或蓝色；H202>2mmol/L时颜色为红或紫，为阴性(-)，H2O2<2mmol/L为阳性(+)，颜色为蓝；NAG不显色表示阴性，显示淡黄色表示弱阳性，显示黄色表示阳性；PH值对照比色卡进行判读。用悬滴法将含有阴道分泌物的生理盐水悬滴于载玻片上，(X400倍)观察，看到滴虫为阳性，未见到为阴性；将阴道分泌物图片后革兰氏染色，在10X40倍显微镜下观察，观察阴道微生态菌种，看到抱子或假丝酵母菌为真菌阳性，否则阴性。正常微生态环境：NAG(-)；SNA(-)；LE(-)；GUS(-)；H2Oz(-)；PH值3.8-4.5；滴虫、假丝酵母菌均阴性。以上任何一项异常则为阴道微生态失衡。, 百拇医药(张莉 许继芹 王泓坛 洪颖)